葡萄在生长发育过程中会出现3次落果高峰,‘巨峰’葡萄的落果现象更为严重。从‘巨峰’葡萄中克隆得到1个细胞分裂素响应调节因子VlRR5,该基因有1个磷酸受体结构域(REC)和1个MYB样DNA结合结构域,cDNA全长2 597 bp,编码693个氨基酸,定位在4号染色体上。亚细胞定位在细胞核中。酵母转化试验中,转入pGBKT7-VlRR5的酵母菌可以在SD/-Trp/-Ade/-His/+X-α-Gal缺陷型培养基上正常生长且显蓝色,证明VlRR5具有转录激活活性。荧光定量PCR分析显示,VlRR5的表达具有组织特异性,在叶和茎中表达量较高;在幼果发育阶段呈现先升高后降低的趋势;并且在外源细胞分裂素CPPU处理后表达量上升,在细胞分裂素合成抑制剂洛伐他汀处理后表达量下降。这些结果表明VlRR5可以响应外源细胞分裂素处理,在细胞分裂素介导葡萄坐果过程中发挥重要作用。
从甜樱桃基因组中鉴定了4个磷酸蔗糖合酶(sucrose phosphate synthase,SPS)基因(PavSPSA1、PavSPSA2、PavSPSB和PavSPSC)。实时荧光定量PCR分析表明,PavSPSA1在甜果实发育和成熟过程中表达量最高,其次是PavSPSC,PavSPSA2和PavSPSB表达量较低;PavSPSA1和PavSPSA2在果实成熟软化过程中均上调表达,与甜樱桃果实的成熟软化过程吻合。通过利用病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术沉默PavSPSA1,甜樱桃果实蔗糖含量降低,果实着色和果实成熟软化延迟;沉默PavSPSA2、PavSPSB和PavSPSC,甜樱桃果实蔗糖含量、果实着色和果实成熟软化与对照无差异,推测PavSPSA1或许是调控果实蔗糖合成与积累的关键基因,影响果实着色和成熟软化。
为探究“饥饿胁迫”诱导龙眼果实脱落的调控机制,以‘储良’龙眼为试材,在果实发育早期对结果母枝进行环剥去叶处理,模拟中断果穗碳素供应所引发的饥饿胁迫,测定处理后0、1、3、5、6 d果皮及果柄离区的糖与脱落酸(ABA)含量及相关基因的表达水平。结果表明:果实在处理后5 ~ 6 d发生大量脱落;果皮中可溶性总糖及各组分(葡萄糖、果糖、蔗糖)含量显著下降,以3 d内的降幅较大,且蔗糖与葡萄糖的降幅显著大于果糖;离区的可溶性总糖及蔗糖含量也发生类似的变化。处理后ABA含量在果皮中的变化不明显,但在离区中显著增加。饥饿胁迫总体上减弱了果皮与离区中糖与ABA相关基因的表达,在果实脱落早期有关蔗糖代谢基因(NI、SS1、SPS1)、糖信号基因(HXK2、TPS1、SnRK2)及ABA代谢基因(AAO3、NCED、BG)的表达均明显下降,但在大量落果时期NI、SS1、HXK2、SnRK2、AAO3、NCED等基因的表达一度增强,使得蔗糖急剧减少,导致糖信号的产生和ABA的积累。以上结果说明,糖与ABA之间的信息交流可能与碳水化合物饥饿胁迫诱导的龙眼果实脱落有关。
以红花草莓品种‘莓红’为研究材料,观察花瓣发育过程中色泽及花色苷变化规律,同时对4个发育时期花瓣进行转录组测序,基于相关性筛选花色苷合成途径的关键功能基因及转录调控因子,结果表明:(1)花瓣发育过程中,花色苷总含量呈先升后降趋势,且在半开期达到最高;(2)花色苷合成途径关键功能基因FaPAL、Fa4CL-1、Fa4CL-2、FaDFR、Fa3GT表达水平与花色苷含量正相关;(3)R2R3-MYB基因FaMYB6和FaMYB90与花色苷含量呈正相关;(4)Pearson相关性分析表明FaMYB6与FaPAL、FaDFR显著正相关,FaMYB90与FaPAL、Fa4CL-1、Fa4CL-2、FaDFR、Fa3GT极显著正相关,FaMYB82则与上述5个结构基因之间均极显著负相关。综上,‘莓红’草莓花瓣发育过程中,花色苷积累引起花瓣颜色变红,FaMYB82、FaMYB6、FaMYB90可能通过调节FaPAL、Fa4CL、FaDFR和Fa3GT的表达来调控花瓣色泽形成。
利用NCBI、GDR数据库对草莓LIM家族候选基因在草莓基因组水平进行生物信息学分析,鉴定获得4个亚族37个候选LIM基因,其中9个来自森林草莓(Fragaria vesca L.),28个来自凤梨草莓(F. ananassa Duch.)。草莓LIM家族候选基因主要分布在细胞核;其密码子偏好性较弱,偏向使用以A/T结尾的同义密码子。FvLIM和FaLIM启动子序列上游2 kb区域包含大量激素及非生物胁迫响应元件。10% PEG、200 mmol · L-1 NaCl、4 ℃低温胁迫下,随着处理时间延长LIM家族候选基因在凤梨草莓‘红颜’中比森林草莓中上调趋势更明显。4 ℃低温处理下,森林草莓中以FvLIM5(12 h)和FvLIM7(24 h)上调最为明显,而凤梨草莓‘红颜’中以FaLIM25(12 h)和FaLIM18(24 h)上调最为显著,总体对低温响应较明显。实时荧光定量PCR分析结果表明,草莓LIM家族候选基因在不同组织中的表达量存在一定差异,在根和花中的表达量偏高。综合以上分析结果,预测草莓LIM家族候选基因可能在响应非生物胁迫以及根和花的发育中发挥重要作用。
在设施弱光环境下对番茄植株采取顶部和植株间两个部位LED补光的方式,研究其对植株形态、光合效率和激素代谢的影响。结果发现顶部补光对不同位置叶片光合效率均有促进作用,并导致整体叶面积增大、植株变矮、叶夹角变小以及开花数增多,植株形态变化伴随生长素(IAA)含量降低、细胞分裂素(CK)含量升高以及油菜素内酯(BR)合成基因下调。植株间补光主要促进中部和下部叶片光合效率提高和叶面积增大,显著增加株高,能使上部叶片夹角略有增加,但对开花数没有影响,整体上对激素代谢的影响不如顶部补光。总体而言,顶部补光更有利于形成良好株形,整体上促进番茄光合作用和生长,有更高的推广应用价值。
以番茄‘金鹏8号’为材料,在普通EVA(乙烯—乙酸乙烯酯共聚物膜)中添加不同转光剂形成的转光棚膜,覆盖日光温室中比较不同棚膜对番茄植株生长、叶片光合能力以及果实产量和品质的影响。采用荧光光度计、红外光谱仪和双光束紫外可见光分光光度计对EVA膜(对照)、EVA膜加转光剂VTB470的转光膜C-RBI-2和EVA加转光剂VTB450的转光膜C-RBI-3的光学特性和力学特性(厚度、拉伸强度、断裂伸长率和直角撕裂强度)进行了测定。结果表明:C-RBI-2膜将紫外光转为蓝光,发射光谱在470 nm,覆盖C-RBI-2膜能够通过提高番茄叶片内Rubisco小亚基基因(RbcS)的表达、提高叶片的组织结构紧密度(CTR)和叶片组织疏松度(SR)、增加栅栏细胞、海绵细胞和叶片的厚度进而提高净光合速率(Pn)。覆盖C-RBI-2膜能够增加根系对全氮(N)、全磷(P)和全钾(K)的吸收,提高番茄产量,增加成熟期果实八氢番茄红素合成酶1基因(PSY1)、八氢番茄红素脱氢酶基因(PDS)和ζ-胡萝卜素脱氢酶基因(ZDS)的表达量,进而增加番茄红素含量;而C-RBI-3膜将紫外光转为蓝光,发射光谱在450 nm,抑制了RbcS和RbcL基因的表达,降低了番茄叶片中Pn和Rubisco活性,降低了番茄红素含量。明确了紫外光转蓝光,发射光谱在470 nm具有提高番茄叶片光合能力和番茄红素含量的作用。由此可知,覆盖C-RBI-2转光膜可有效促进秋冬茬日光温室内番茄叶片光合能力,提高番茄品质。
以瓜类褪绿黄化病毒(cucurbit chlorotic yellows virus,CCYV)山东寿光分离物作为研究对象,对其RNA1编码的P6蛋白进行克隆,发现其基因全长为159 bp,编码1个大约6 kD的蛋白,并含1个跨膜区。进一步构建了带有YFP标签的荧光表达载体P6-YFP,浸润本氏烟叶片后利用激光共聚焦显微镜观察,发现P6-YFP在细胞质和细胞核均有分布。将P6构建到马铃薯X病毒(potato virus X,PVX)异源表达载体获得的PVX-P6接种本氏烟,发现接种PVX-P6的植株新叶伴有明显黄化、皱缩等症状,并沿叶脉出现坏死,而接种PVX空载体的植株仅有轻微的花叶,表明在PVX异源表达系统中,P6诱导寄主植物出现更严重的症状,暗示P6能增强PVX的致病性,可能是参与症状形成的致病相关因子。
为明确黄花菜‘大同黄花’(Hemerocallis citrina‘Datong Huanghua’)的开花特性与繁育系统对有性繁殖的影响,推进黄花菜杂交育种进程,对其花器官形态特征与开花动态、不同储藏温度下花粉活力变化、柱头可授性、繁育系统类型以及杂交结实率进行了观测与研究。结果表明:(1)其花期从6月中下旬开始,7月底至8月初结束;成熟期花蕾为黄绿色,开放时为鲜黄色,单花开放时间约12 h;花粉粒为椭圆形,外壁具有清晰而深刻的网状雕纹。(2)随着储藏时间延长,不同储藏温度下花粉活力均出现降低的趋势,花粉在60 d的储藏期内,-80 ℃超低温储藏条件较25、4、-20和-40 ℃条件下其花粉活力最高。(3)在开花过程中,其柱头可授性先升高后降低,花瓣打开后3 h柱头可授性可达到最强,在花瓣打开30 h后失去可授性。(4)杂交指数(out crossing index,OCI)为4,花粉胚珠比(P/O)为2 446.22,自然异花授粉坐果率显著高于人工自花授粉,由此判断其繁育系统为兼性异交。(5)在供试的多个亲本杂交试验中,‘大同黄花’为父本的结实率显著高于其为母本的结实率。
采用顶空—固相微萃取和气相色谱—质谱联用技术(HS-SPME-GC-MS)测定浙江楠(Phoebe chekiangensis)、闽楠(P. bournei)、紫楠(P. sheareri)、小叶桢楠(P. zhennan f. oblong)和大叶桢楠(P. zhennan f. elliptical)叶片挥发性成分,并比较浙江楠叶片在不同季节、不同方位和不同温度下的挥发性成分差异及其日变化规律。结果表明,5种楠属植物叶片共检测出80种化合物,其中浙江楠52种、闽楠55种、紫楠41种、小叶桢楠56种、大叶桢楠46种,(+)-β-瑟林烯、3-己烯-1-醇和β-榄香烯可能为浙江楠叶片香气的特征物质。在夏季和秋季浙江楠叶片中分别鉴定出70和64种化合物,其中夏季西方位叶片成分种类最多,而秋季北方位叶片成分种类最多。正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)表明南、北方位叶片成分差异大,而东、西方位叶片成分较相似。α-古巴烯和α-葎草烯等含量在不同温度培养下的浙江楠叶片中存在显著差异,其中15和25 ℃下挥发性成分相近,而45 ℃下的成分显著区别于其他温度。挥发性成分日变化分析发现浙江楠叶片α-古巴烯、β-荜澄茄烯和γ-摩勒烯等8种物质在12:00或14:00出现高峰,而β-石竹烯、右旋大根香叶烯和β-榄香烯等10种物质在12:00或14:00最低。研究结果可为浙江楠等楠属植物精油的开发利用及以楠属植物为主体林分的森林康养提供参考。
克隆了百子莲(Agapanthus praecox)脱水素基因ApSK3上游2 195 bp的启动子序列,对百子莲不同组织和多种非生物胁迫与ABA处理的样品进行基因定量分析,构建多个ApSK3不同长度缺失的启动子片段与GUS基因融合的表达载体并转化拟南芥,以揭示ApSK3基因对不同逆境与激素信号的应答模式及顺式作用元件的调控功能。结果表明:ApSK3启动子序列包含多个与植物逆境、激素应答及生长发育相关的顺式作用元件,且ApSK3的表达具有组织特异性,果实中表达量最高,叶、根次之,花中最低;ApSK3对ABA信号与盐胁迫最敏感,其次为干旱、高渗和低温胁迫,对高温胁迫响应不明显。ApSK3-P::GUS 融合表达载体转化拟南芥,ApSK3启动子在拟南芥的整个生长发育过程中均具有较强的表达活性,幼苗根部的表达活性强于叶片,且随着果实的发育成熟启动子的活性明显增强。ApSK3不同长度缺失的启动子片段分析结果表明-2 175 ~-950 bp片段对启动子的活性起到重要的调控作用;多个顺式作用元件响应干旱胁迫;ApSK3-P通过两个ABRE元件共同响应ABA信号;-526 ~-533 bp的 ERE元件参与响应乙烯信号;-561 ~-567 bp的P-box元件响应了赤霉素信号,-2 175 ~-1 167 bp区域可以增强对GA的响应。研究结果证明ApSK3启动子可积极响应干旱、渗透、盐、低温、ABA、GA和乙烯信号;启动子上存在多个顺式作用元件响应干旱胁迫,ApSK3-P通过两个ABRE、ERE与P-box元件分别响应ABA、乙烯与赤霉素信号。
以柑橘砧木三湖红橘(Citrus reticulata Blanc.)、枳[Poncirus trifoliata(L.)Raf.]、枳橙(C. sisensis × P. trifoliata‘Carrizo’)和崇义野橘(C. reticulata‘Chongyi’)2年生实生苗老熟叶片为材料进行脱水处理,测定相对失水率和电导率,并用印迹法和石蜡切片技术比较叶片的显微结构,对4种砧木的抗旱性进行主成分分析。三湖红橘在脱水处理下叶片保水性好,细胞膜受伤害程度最小;气孔密度(325个 · mm-2),显著低于其他3个品种,气孔开度减小速度最快;栅栏组织结构分明,较其他3个品种更发达;叶肉栅栏组织厚度与海绵组织厚度之比为0.56,极显著大于其他3个品种。4种柑橘砧木的抗旱性由强到弱依次为三湖红橘 > 枳 > 崇义野橘 > 枳橙 。综上,三湖红橘是1个优良的抗旱型柑橘种质资源。
为明确陕西省草莓主要病毒种类及各种病毒在主产区的地理分布,通过LncRNA测序结合反转录聚合酶链式反应(reverse transcription PCR,RT-PCR)对陕西省草莓主产区西安、咸阳和宝鸡的7个区或县的草莓疑似感染病毒病样品进行了检测。结果表明草莓斑驳病毒(strawberry mottle virus,SMoV)和草莓镶脉病毒(strawberry vein band virus,SVBV)在7个区或县均有发生,而草莓轻型黄边病毒(strawberry mild yellow edge virus,SMYEV)、菠菜潜隐病毒(spinach latent virus,SpLV)和番茄线虫传多面体病毒(Lycopersicon esculentum nepovirus,LENV)局部发生。首次报道在草莓上检测到SpLV和LENV。
为探明sly-miR166b在番茄抗晚疫病中的作用,分别构建了sly-miR166b的过表达载体和沉默载体,将它们在番茄离体叶片中瞬时表达,结果发现,过表达sly-miR166b下调了其靶基因的表达量,与空载体对照相比,晚疫病菌接种后叶片上相对病斑面积明显变小;而沉默sly-miR166b则上调了其靶基因的表达量,病菌接种后叶片上相对病斑面积较对照明显变大。初步表明,过表达sly-miR166b增强了植株对晚疫病的抗性,沉默sly-miR166b增强了植株的感病性,这为全面揭示sly-miR166b的抗病机制奠定了基础。
采用改良DAPI荧光染色技术对芥蓝游离小孢子胚胎发生过程进行观察,同时比较培养基中添加2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)对6个基因型芥蓝成胚的影响,并对再生植株的倍性和结实性进行鉴定。结果表明:芥蓝小孢子胚胎发生以B途径为主,但也存在A途径。小孢子第1次核非均等分裂或均等分裂形成不对称细胞即可建立极性特征,各类胚状体的形成似有其各自发育路径。2,4-D对成胚的影响因基因型而异,添加0.01 ~ 0.1 mg · L-1 2,4-D对‘绿宝’‘芊翠’和‘泽美’3个基因型芥蓝的成胚无显著影响;对于‘夏翠’,除0.1 mg · L-1 2,4-D显著降低子叶胚产量外,其他类型胚状体的产量不受影响;0.05和0.1 mg · L-1 2,4-D可分别显著增加‘顺宝’球形胚和鱼雷胚的产量,因而其总胚产量显著增加;对于成胚能力极强的‘顺宝2号’,心形胚、球形胚、其他类型胚状体及总胚产量均随着2,4-D浓度增大而显著提高,但子叶胚产量显著减少。添加2,4-D对‘顺宝2号’小孢子启动分裂无显著影响,但可维持或提高已启动分裂细胞的再分裂能力,减少中途退化或败育,从而提高胚产量。对获得150个再生株系进行倍性检测,单倍体株系占72.7%,DH系占22.7%,其他包括非整倍体和嵌合体在内的株系仅占4.6%。DH或单双倍体的嵌合体植株蕾期授粉后均能正常结实,而其他非整倍体(包括嵌合体)不结实或结实率极差。因此,可先根据植株花粉的有无、蕾期授粉后的结实性、叶形态以及生长势等判定出单倍体、DH和单倍体 + 二倍体植株,其他有花粉而不结实或结实不良的植株则可采用流式细胞仪检测其倍性。
通过测定转匍匐翦股颖小热激蛋白基因AsHSP26.8a拟南芥株系的根长、植株质量、蒸腾速率、气孔导度、净光合速率以及PSⅡ光能转化效率,探讨AsHSP26.8a对拟南芥光合作用的影响,并进一步通过qRT-PCR分析了拟南芥内源光合相关基因(rbcL、psaA、psbA、psaE、clpP、rpoB、rpoA、accD)的表达情况来揭示AsHSP26.8a参与光合作用的调控途径。结果表明:与野生型相比,转基因拟南芥根长显著缩短,鲜质量和干质量下降;光合速率、蒸腾速率、气孔导度和PSⅡ光能转化效率均有所下降,光合相关基因的表达也有所下调。由此认为AsHSP26.8a抑制了转基因拟南芥光合相关基因的表达,使转基因拟南芥的光合作用减弱,从而进一步抑制了转基因拟南芥根系生长和干物质的积累。
利用无人机连续两年在同一个葡萄园开展了4个品种长势监测和缺株定位探索,以飞行高度70 m,速度5 m · s-1,在监测面积187 015 m2上利用多光谱相机共获得数据69 296 004个,每个像素点对应地面5 cm × 5 cm。以EnsoMOSAIC软件对数据进行处理,获得归一化植被指数(NDVI)。以NDVI > 0.75为长势优良的标准,2019年葡萄园长势评定为“一般”“良好”“优良”的面积分别为20.51%、46.15%和35.90%。2020年10月初葡萄园遭遇早霜,NDVI数据明显降低,表明NDVI可用于葡萄园霜冻损害的快速评估。以连续性 < 0.6为标准进行缺株定位,有12行存在缺株且80%以上分布在长势“一般”的地块中,与对地块整体长势评估结果一致。本研究结果表明基于无人机的高光谱遥感成像技术在葡萄园风土(terrior)划分、植株长势分析与霜冻评估中均有良好的应用前景。
‘砀山金酥’是由安徽省砀山县发现的‘砀山酥梨’高糖芽变选育而来。果实卵圆形,果皮褐色。平均单果质量355.4 g。可溶性固形物含量14.5%,显著高于‘砀山酥梨’,可溶性糖含量11.2%,有机酸含量0.11%,维生素C含量77.0 μg · g-1,硬度为3.74 kg · cm-2。物候期与‘砀山酥梨’相近。
‘晚脆香’是由CP10与‘砀山酥梨’杂交选出的梨新品种。果实长圆形,果个大,平均单果质量376 g;果皮底色黄绿色,盖色为红色,果点密;梗洼和萼洼浅,萼片脱落;果肉白色,肉质细脆,硬度6.4 kg · cm-2,汁液多,酸甜适口,果心小,可溶性固形物含量14.4%。在辽宁兴城地区,果实10月中旬成熟,耐贮藏,丰产稳产,盛果期产量约39 750 kg · hm-2。
佛手新品种‘翠指’由‘青皮’佛手自然芽变体经嫁接培育而成。树姿呈直立状;顶部枝条表面有纵向黄绿相间的条纹;嫩叶颜色为黄、绿或斑驳分布;成熟叶大多为黄、绿色,大而厚,凹凸不平;幼果果面有纵向黄绿间隔条纹分布,转色后绿色部分变为金黄色,完全成熟后全果果皮均变成金黄色,观赏价值高,适宜制作盆景。