应应用PCR及Nested-PCR技术检测柑橘黄龙病病原研究

园艺学报 ›› 2004, Vol. 31 ›› Issue (6): 803-806.

应应用PCR及Nested-PCR技术检测柑橘黄龙病病原研究

丁　芳^1,2;易干军²*;王国平^1*

(¹华中农业大学植物科学技术学院, 武汉430070 ; ² 广东省农业科学院果树研究所, 广州510640)

收稿日期:2004-03-03 修回日期:2004-06-01 出版日期:2004-12-25 发布日期:2004-12-25

Research on the PCR and Nested-PCR Detection of Citrus HuanglongbingPathogen

Ding Fang^1,2;Yi Ganjun^2*;Wang Guoping^1*

(¹ Plant Science and Technology Academy , Huazhong Agriculture University , Wuhan 430070 , China ; ² Insititute of Fruit Tree Reseach , Guangdong Academy of Agricultural Science , Guangzhou 510640 , China)

Received:2004-03-03 Revised:2004-06-01 Online:2004-12-25 Published:2004-12-25

摘要/Abstract

摘要： 以采自田间和广东省农业科学院果树研究所防虫隔离网室内嫁接并感染黄龙病的5 个柑橘品种叶片为材料, 以草本指示植物长春花( Catharanthus roseas) 和木本指示植物　柑( Citrus reticulata Blanco) 鉴定为基础, 采用改良的CTAB 法提取总DNA , 在此基础上进行常规PCR 与Nested-PCR 检测, 并对特异目的片段进行克隆、测序。试验证明Nested-PCR 比常规PCR 的灵敏度更高。这两种方法均可以检测出未显症的黄龙病材料, 但Nested-PCR 可以在木本指示植物嫁接后40 d 左右、草本指示植物摩擦接种1 个月左右检测到病原;而常规PCR 在木本植物嫁接后60 d 左右、草本植物摩擦接种近2 个月左右才能检测到病原。常规PCR 所能检测到的最低DNA 的量为pg 数量级; Nested-PCR 检测病原DNA 灵敏度约为常规PCR 的104 倍。

关键词: 柑橘, 黄龙病, PCR, Nested-PCR, 检测

Abstract:

The experiment was conducted with five species of citrus Huanglongbing material . On the base of the bioassay , we used PCR and Nested2PCR were used to detect precisely. The special DNA fragment was cloned and sequenced. The results showed that : both of these two PCR methods can detect the material with no obvious symptom. However the Nested-PCR was better : It could detect the Catharanthus roseas and Citrus reticulata Blanco just within one or two months after the inoculation ; but when PCR was used , the pathogen could be detected over two months after inoculation. The lowest concentration of DNA that can be detected by Nested2PCR was lower than fg , yet PCR is only pg. The sensitivity of Nested2PCR is nearly ten thousand times higher than that of PCR.

Key words: Citrus, Huanglongbing, PCR, Nested2PCR, Detection

中图分类号:

S 666

丁　芳;易干军;王国平. 应应用PCR及Nested-PCR技术检测柑橘黄龙病病原研究[J]. 园艺学报, 2004, 31(6): 803-806.

Ding Fang;Yi Ganjun;Wang Guoping. Research on the PCR and Nested-PCR Detection of Citrus HuanglongbingPathogen[J]. ACTA HORTICULTURAE SINICA, 2004, 31(6): 803-806.

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