大白菜几丁质酶基因CHB4的克隆及序列分析

园艺学报 ›› 2007, Vol. 34 ›› Issue (1): 105-110.

大白菜几丁质酶基因CHB4的克隆及序列分析

甘德芳¹ ; 朱苏文² ;范　军² ; 程备久^2*

( ¹安徽农业大学园艺学院, 合肥230036; ²安徽农业大学生命科学学院, 合肥230036)

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2007-02-25 发布日期:2007-02-25

Cloning and Sequence Analysis of Chinese Cabbage Chitinase Gene CHB4

GAN De-fang¹ ; ZHU Su-wen² ;FAN Jun² ; CHENG Bei-jiu^2*

(¹ School of Horticulture, Anhui Agricultural University, Hefei 230036, China; ² School of L ife Science, Anhui AgriculturalUniversity, Hefei 230036, China)

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2007-02-25 Published:2007-02-25

摘要/Abstract

摘要： 根据已知的几种十字花科植物几丁质酶基因保守序列设计特异性引物, 以大白菜叶片基因组
DNA为模板, 通过PCR反应扩增出约1 kb的DNA片段和几丁质酶基因5′端序列片段(150 bp) 。利用不同
浓度的水杨酸处理苗龄7 d的大白菜, 选择酶活力较高的处理植株叶片提取RNA, 采用RACE技术扩增。
研究结果表明, CHB 4基因的DNA序列长度为1 517 bp (DDBJ 登录号: AB257452) , 包含有1个长度为
508 bp内含子。该基因编码的产物是由268个氨基酸残基组成的蛋白质, 氨基酸序列与油菜ClassⅣ类几丁
质酶的同源性达99% , 与其它几种高等植物的同源性达50%以上。

关键词: 大白菜, 几丁质酶基因, 克隆, RACE

Abstract: Based on the conserved sequence of the chitinase of crucifers, about 1 kb DNA fragment and
5′2 end fragment (150 bp) were amp lified by PCR from genomic DNA of Chinese cabbage. Experimentswere
performed on 72day2old Chinese cabbage seedlings after germination with salicylic acid of different concentra
tions. Total RNA was p repared from the p lantwith higher chitinase activity, and 3′2 end fragmentwas amp li
fied by 3′RACE. Comparing Chinese cabbage chitinase sequence cloned in this experimentwith that reported
in GenBank composed of 1 094 bp nucleotide of Brassica napus, the experiment showed that the chitinase se
quence of Chinese cabbage is 1 517 bp in size with one intron of 508 bp (DDBJ accession number:
AB257452) , and shares as high as 99% identitywith B. napus and over 50% with other high p lants in cod
ing region.

Key words: Chinese cabbage, Chitinase gene, Clone, RACE

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