园艺学报 ›› 2025, Vol. 52 ›› Issue (10): 2787-2798.doi: 10.16420/j.issn.0513-353x.2024-0797
        
               		陈越1,2,3,*, 郑雪1,*, 董坤4, 吴阔1, 肖祥丽5, 李妤1, 张洁1,**(
)
                  
        
        
        
        
    
收稿日期:2024-11-22
									
				
											修回日期:2025-06-04
									
				
									
				
											出版日期:2025-10-25
									
				
											发布日期:2025-10-28
									
			通讯作者:
					作者简介:*共同第一作者
基金资助:
        
               		CHEN  Yue1,2,3, ZHENG  Xue1, DONG  Kun4, WU  Kuo1, XIAO  Xiangli5, LI  Yu1, ZHANG  Jie1,**(
)
			  
			
			
			
                
        
    
Received:2024-11-22
									
				
											Revised:2025-06-04
									
				
									
				
											Published:2025-10-25
									
				
											Online:2025-10-28
									
			摘要:
为明确侵染云南芋[Colocasia esculenta(L.)Schott]样品的病毒病原种类,对采集自云南省富源县疑似病毒病症状的芋样品进行了病毒检测。利用菜豆金色花叶病毒属(Begomovirus)、马铃薯Y病毒属(Potyvirus)、正番茄斑萎病毒属(Orthotospovirus)和烟草花叶病毒属(Tobamovirus)等病毒属的通用引物及辣椒脉斑驳病毒(chilli veinal mottle virus,ChiVMV)的特异性引物对云南芋样品进行PCR及RT-PCR检测,通过克隆、测序获得云南芋ChiVMV分离物的CP基因序列,并结合GenBank中已公布的ChiVMV其他分离物的CP基因,利用生物信息软件对其进行遗传变异和种群遗传结构分析。结果显示,ChiVMV CP基因在进化过程中的保守性较高,本研究中获得的云南芋分离物与29个ChiVMV分离物CP基因核苷酸和氨基酸序列的一致性分别为85.13% ~ 99.65%和90.59% ~ 99.65%;系统发育分析与性状关联分析显示,ChiVMV的遗传分化与分离物的地理来源在一定程度上存在显著的相关性,而与寄主植物的种类无明显的相关性;遗传多样性和种群遗传结构分析表明,受到地理因素的影响,4个地理种群ChiVMV分离物均表现出较高的遗传多样性水平,遗传漂变和基因流是ChiVMV种群遗传变异的重要方式。本研究是ChiVMV自然侵染天南星科植物——芋的首次报道,研究结果丰富了ChiVMV的寄主范围及种群遗传信息,对监测ChiVMV在中国的扩散具有重要意义。
陈越, 郑雪, 董坤, 吴阔, 肖祥丽, 李妤, 张洁. 侵染芋的辣椒脉斑驳病毒的分子鉴定及遗传变异分析[J]. 园艺学报, 2025, 52(10): 2787-2798.
CHEN Yue, ZHENG Xue, DONG Kun, WU Kuo, XIAO Xiangli, LI Yu, ZHANG Jie. Molecular Identification and Genetic Variation Analysis of Chilli Veinal Mottle Virus Infecting Taro[J]. Acta Horticulturae Sinica, 2025, 52(10): 2787-2798.
| 病毒 Viruses  |  引物 Primers  |  序列(5′-3′) Sequence  |  长度/bp Length  | 
|---|---|---|---|
| Begomovirus | PA | TAATATTACGKGWKGVCCSC | 530 | 
| PB | TGGACYTTRCAWJJBCCGCACA | ||
| PCRc1 | CATATTTACRARWATGCCA | 650 | |
| PBL1v2040 | CARTGRTCKATCTTCATACA | ||
| Potyvirus | CIFor | GGI VVI GTI GGI WSI GGI AAR TCI AC | 680 | 
| CIRev | ACI CCR TTY TCD ATD ATR TTI GTI GC | ||
| Orthotospovirus | dTospo-F2 | GATCAATCNAARTGGTCDGCWTC | 312 | 
| dTospo-R2 | CATDGCACAAGARTGRTAVACWGA | ||
| Tobamovirus | TobamodF | TKGAYGGNGTBCCNGGNTGYGG | 880 | 
| TobamodR | TTAGCCTGGAGGATGGGACA | ||
| ChiVMV | ChiVMV-CP-F | TATCTGAAGGCACTCATTGA | 1 030 | 
| ChiVMV-CP-R | GGAACCACACTGAGGAATA | 
表1 用于芋样品病毒鉴定的引物信息
Table 1 Primer information for virus identification in taro samples
| 病毒 Viruses  |  引物 Primers  |  序列(5′-3′) Sequence  |  长度/bp Length  | 
|---|---|---|---|
| Begomovirus | PA | TAATATTACGKGWKGVCCSC | 530 | 
| PB | TGGACYTTRCAWJJBCCGCACA | ||
| PCRc1 | CATATTTACRARWATGCCA | 650 | |
| PBL1v2040 | CARTGRTCKATCTTCATACA | ||
| Potyvirus | CIFor | GGI VVI GTI GGI WSI GGI AAR TCI AC | 680 | 
| CIRev | ACI CCR TTY TCD ATD ATR TTI GTI GC | ||
| Orthotospovirus | dTospo-F2 | GATCAATCNAARTGGTCDGCWTC | 312 | 
| dTospo-R2 | CATDGCACAAGARTGRTAVACWGA | ||
| Tobamovirus | TobamodF | TKGAYGGNGTBCCNGGNTGYGG | 880 | 
| TobamodR | TTAGCCTGGAGGATGGGACA | ||
| ChiVMV | ChiVMV-CP-F | TATCTGAAGGCACTCATTGA | 1 030 | 
| ChiVMV-CP-R | GGAACCACACTGAGGAATA | 
																													图2 云南芋样品的PCR及RT-PCR扩增结果 24YNFY:云南富源芋样品;N:阴性对照;P:阳性对照
Fig. 2 PCR and RT-PCR amplification results of ChiVMV-CP primers in partial Yunnan taro sample 24YNFY:The taro sample from Fuyuan County,Yunnan Province:N:Negative control;P:Positive control
| 分离物 Isolate  |  来源 Origin  |  寄主 Host  |  GenBank登录号 Accession No.  |  一致性/% Identity | |
|---|---|---|---|---|---|
| 核苷酸 Nucleotide sequences  |  氨基酸 Amino acid sequences  | ||||
| 74PAV | 意大利 Italy | 辣椒 Pepper | KX889918 | 91.52 | 97.56 | 
| AABC2PK | 巴基斯坦 Pakistan | 辣椒 Pepper | KX236451 | 89.78 | 94.43 | 
| AH | 安徽 Anhui | 辣椒 Pepper | PP582383 | 85.71 | 90.59 | 
| ATIPK | 巴基斯坦 Pakistan | 辣椒 Pepper | KJ472764 | 86.41 | 92.33 | 
| CHM19 | 印度 India | 辣椒 Pepper | EF213689 | 85.13 | 90.94 | 
| Chi Mv Uravakonda | 印度 India | 辣椒 Pepper | MN508960 | 85.95 | 91.29 | 
| ChiVMV-LS | 四川 Sichuan | 烟草 Tobacco | PP871400 | 89.90 | 96.52 | 
| ChiVMV-PK | 巴基斯坦 Pakistan | 辣椒 Pepper | MN207122 | 87.11 | 91.29 | 
| ChiVMV-YuN Yuxi4 | 云南 Yunnan | 龙葵Nightshade | ON838425 | 89.66 | 96.52 | 
| ChiVMV-YuN Yuxi5 | 云南 Yunnan | 辣椒 Pepper | ON838424 | 85.71 | 91.99 | 
| D10 | 印度 India | 辣椒 Pepper | EF221615 | 85.25 | 91.64 | 
| GD | 广东 Guangdong | 辣椒 Pepper | KU987835 | 86.30 | 90.94 | 
| GX | 广西 Guangxi | 辣椒 Pepper | MT782116 | 86.76 | 91.99 | 
| GZ-tobacco | 贵州 Guizhou | 烟草 Tobacco | OP378160 | 89.43 | 96.17 | 
| GZ109 | 贵州 Guizhou | 南瓜 Pumpkin | OR734212 | 98.61 | 99.30 | 
| GZ111 | 贵州 Guizhou | 鱼腥草Houttuynia cordata | OR734224 | 98.72 | 99.30 | 
| GZ84 | 贵州 Guizhou | 莴苣 Lettuce | OR727862 | 89.78 | 96.17 | 
| GZ91 | 贵州 Guizhou | 苋 Amaranth | OR727863 | 90.59 | 95.82 | 
| LJ | 四川 Sichuan | 番茄 Tomato | KF738253 | 98.95 | 98.61 | 
| LNSY-LKC | 辽宁 Liaoning | 龙葵Nightshade | MG674072 | 94.19 | 99.30 | 
| MBDS | 印度 India | 辣椒 Pepper | OR820901 | 93.96 | 98.95 | 
| Sichuan Luzhou | 四川 Sichuan | 烟草 Tobacco | MK405594 | 99.30 | 99.65 | 
| To | 印度 India | 番茄 Tomato | OR347840 | 85.37 | 91.29 | 
| Tomato_Thirumalapura | 印度 India | 番茄 Tomato | MK165662 | 85.13 | 90.59 | 
| Wenchang | 海南 Hainan | 辣椒 Pepper | GQ981316 | 85.71 | 91.64 | 
| YN | 云南 Yunnan | 辣椒 Pepper | MT974520 | 91.41 | 97.21 | 
| YN-tobacco | 云南 Yunnan | 烟草 Tobacco | JX088636 | 89.66 | 96.52 | 
| Zunyi | 贵州 Guizhou | 烟草 Tobacco | PQ126526 | 99.65 | 99.66 | 
| 02ChiVMV | 云南 Yunnan | 人参果 Ginseng fruit | OM829894 | 94.31 | 99.30 | 
表2 云南芋ChiVMV分离物24YNFY CP基因与其他分离物核苷酸和氨基酸序列的一致性分析
Table 2 Nucleotide and amino acid sequences identities of CP gene between isolate 24YNFY and other ChiVMV isolates
| 分离物 Isolate  |  来源 Origin  |  寄主 Host  |  GenBank登录号 Accession No.  |  一致性/% Identity | |
|---|---|---|---|---|---|
| 核苷酸 Nucleotide sequences  |  氨基酸 Amino acid sequences  | ||||
| 74PAV | 意大利 Italy | 辣椒 Pepper | KX889918 | 91.52 | 97.56 | 
| AABC2PK | 巴基斯坦 Pakistan | 辣椒 Pepper | KX236451 | 89.78 | 94.43 | 
| AH | 安徽 Anhui | 辣椒 Pepper | PP582383 | 85.71 | 90.59 | 
| ATIPK | 巴基斯坦 Pakistan | 辣椒 Pepper | KJ472764 | 86.41 | 92.33 | 
| CHM19 | 印度 India | 辣椒 Pepper | EF213689 | 85.13 | 90.94 | 
| Chi Mv Uravakonda | 印度 India | 辣椒 Pepper | MN508960 | 85.95 | 91.29 | 
| ChiVMV-LS | 四川 Sichuan | 烟草 Tobacco | PP871400 | 89.90 | 96.52 | 
| ChiVMV-PK | 巴基斯坦 Pakistan | 辣椒 Pepper | MN207122 | 87.11 | 91.29 | 
| ChiVMV-YuN Yuxi4 | 云南 Yunnan | 龙葵Nightshade | ON838425 | 89.66 | 96.52 | 
| ChiVMV-YuN Yuxi5 | 云南 Yunnan | 辣椒 Pepper | ON838424 | 85.71 | 91.99 | 
| D10 | 印度 India | 辣椒 Pepper | EF221615 | 85.25 | 91.64 | 
| GD | 广东 Guangdong | 辣椒 Pepper | KU987835 | 86.30 | 90.94 | 
| GX | 广西 Guangxi | 辣椒 Pepper | MT782116 | 86.76 | 91.99 | 
| GZ-tobacco | 贵州 Guizhou | 烟草 Tobacco | OP378160 | 89.43 | 96.17 | 
| GZ109 | 贵州 Guizhou | 南瓜 Pumpkin | OR734212 | 98.61 | 99.30 | 
| GZ111 | 贵州 Guizhou | 鱼腥草Houttuynia cordata | OR734224 | 98.72 | 99.30 | 
| GZ84 | 贵州 Guizhou | 莴苣 Lettuce | OR727862 | 89.78 | 96.17 | 
| GZ91 | 贵州 Guizhou | 苋 Amaranth | OR727863 | 90.59 | 95.82 | 
| LJ | 四川 Sichuan | 番茄 Tomato | KF738253 | 98.95 | 98.61 | 
| LNSY-LKC | 辽宁 Liaoning | 龙葵Nightshade | MG674072 | 94.19 | 99.30 | 
| MBDS | 印度 India | 辣椒 Pepper | OR820901 | 93.96 | 98.95 | 
| Sichuan Luzhou | 四川 Sichuan | 烟草 Tobacco | MK405594 | 99.30 | 99.65 | 
| To | 印度 India | 番茄 Tomato | OR347840 | 85.37 | 91.29 | 
| Tomato_Thirumalapura | 印度 India | 番茄 Tomato | MK165662 | 85.13 | 90.59 | 
| Wenchang | 海南 Hainan | 辣椒 Pepper | GQ981316 | 85.71 | 91.64 | 
| YN | 云南 Yunnan | 辣椒 Pepper | MT974520 | 91.41 | 97.21 | 
| YN-tobacco | 云南 Yunnan | 烟草 Tobacco | JX088636 | 89.66 | 96.52 | 
| Zunyi | 贵州 Guizhou | 烟草 Tobacco | PQ126526 | 99.65 | 99.66 | 
| 02ChiVMV | 云南 Yunnan | 人参果 Ginseng fruit | OM829894 | 94.31 | 99.30 | 
																													图3 基于CP基因序列构建辣椒脉斑驳病毒及其相关分离物的系统发育树 Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ为分支;BCMV CP基因序列为外组;★本研究获得的分离物;系统发育树中的分离物以分离物—来源—登录号的形式表示
Fig. 3 Phylogenetic tree based on the sequence of CP gene from chilli veinal mottle virus and its related isolates Ⅰ,Ⅱ and Ⅲ are groups;The CP gene sequence of BCMV is outgroup;★ Isolate obtained in this study;Isolates in the phylogenetic tree are expressed in the form of isolate-source-accession No.
| 统计  Statistic  |  BaTS检验  BaTS estimate(95% *HPD CIs)  |  P值  P-value  | 
|---|---|---|
| AI | 0.76(0.60,0.88) | 0.030 | 
| PS | 6.00(6.00,6.00) | 0.000 | 
| MC(中国) MC(China) | 7.00(7.00,7.00) | 0.030 | 
| MC(印度) MC(India) | 2.11(2.00,3.00) | 0.080 | 
| MC(巴基斯坦) MC(Pakistan) | 1.00(1.00,1.00) | 1.000 | 
表3 ChiVMV分离物的系统发育与地理来源的性状关联检验
Table 3 Association analysis test between phylogenetic and geographical characteristics of ChiVMV isolates
| 统计  Statistic  |  BaTS检验  BaTS estimate(95% *HPD CIs)  |  P值  P-value  | 
|---|---|---|
| AI | 0.76(0.60,0.88) | 0.030 | 
| PS | 6.00(6.00,6.00) | 0.000 | 
| MC(中国) MC(China) | 7.00(7.00,7.00) | 0.030 | 
| MC(印度) MC(India) | 2.11(2.00,3.00) | 0.080 | 
| MC(巴基斯坦) MC(Pakistan) | 1.00(1.00,1.00) | 1.000 | 
| 统计  Statistic  |  BaTS检验  BaTS estimate(95% *HPD CIs)  |  P值  P-value  | 
|---|---|---|
| AI | 1.76(1.51,2.01) | 0.070 | 
| PS | 12.00(12.00,12.00) | 0.000 | 
| MC(辣椒) MC(Pepper) | 4.35(3.00,5.00) | 0.060 | 
| MC(烟草) MC(Tobacco) | 2.23(2.00,3.00) | 0.080 | 
| MC(番茄) MC(Tomato) | 1.00(1.00,1.00) | 1.000 | 
表4 ChiVMV分离物的系统发育与寄主的性状关联检验
Table 4 Association analysis test between phylogenetic and hosts of ChiVMV isolates
| 统计  Statistic  |  BaTS检验  BaTS estimate(95% *HPD CIs)  |  P值  P-value  | 
|---|---|---|
| AI | 1.76(1.51,2.01) | 0.070 | 
| PS | 12.00(12.00,12.00) | 0.000 | 
| MC(辣椒) MC(Pepper) | 4.35(3.00,5.00) | 0.060 | 
| MC(烟草) MC(Tobacco) | 2.23(2.00,3.00) | 0.080 | 
| MC(番茄) MC(Tomato) | 1.00(1.00,1.00) | 1.000 | 
| 群体 Population  |  序列数 Sequence  |  Pi 核苷酸多样性 Nucleotide diversity  |  Hd 单倍型多样性 Haplotype diversity analysis  |  k 核酸差异数 Average number of nucleotide differences  |  Eta 突变位点总数 Total number of mutations  |  S 多态性位点数 Total number of polymorphic sites  | 
|---|---|---|---|---|---|---|
| 中国西南地区种群 Southwest China | 15 | 0.080 ± 0.086 | 1.000 ± 0.006 | 68.990 | 226 | 203 | 
| 印度种群 India | 6 | 0.090 ± 0.097 | 1.000 ± 0.009 | 77.333 | 199 | 186 | 
| 中国沿海地区种群 Coastal areas of China | 5 | 0.090 ± 0.098 | 1.000 ± 0.016 | 77.700 | 173 | 166 | 
| 其他国家种群 Other | 4 | 0.129 ± 0.141 | 1.000 ± 0.031 | 110.667 | 211 | 198 | 
表5 不同种群辣椒脉斑驳病毒CP基因的遗传多样性分析
Table 5 Genetic diversity based on CP gene of chilli veinal mottle virus in different groups
| 群体 Population  |  序列数 Sequence  |  Pi 核苷酸多样性 Nucleotide diversity  |  Hd 单倍型多样性 Haplotype diversity analysis  |  k 核酸差异数 Average number of nucleotide differences  |  Eta 突变位点总数 Total number of mutations  |  S 多态性位点数 Total number of polymorphic sites  | 
|---|---|---|---|---|---|---|
| 中国西南地区种群 Southwest China | 15 | 0.080 ± 0.086 | 1.000 ± 0.006 | 68.990 | 226 | 203 | 
| 印度种群 India | 6 | 0.090 ± 0.097 | 1.000 ± 0.009 | 77.333 | 199 | 186 | 
| 中国沿海地区种群 Coastal areas of China | 5 | 0.090 ± 0.098 | 1.000 ± 0.016 | 77.700 | 173 | 166 | 
| 其他国家种群 Other | 4 | 0.129 ± 0.141 | 1.000 ± 0.031 | 110.667 | 211 | 198 | 
| 变异来源 Source of variation  |  自由度 Degree of freedom  |  平方和 Sum of squares  |  变量组分 Variation component  |  变异百分比/% Percentage of variation  | 
|---|---|---|---|---|
| 不同种群间Among populations | 3 | 385.267 | 13.553 Va | 26.10 | 
| 种群内Within populations | 26 | 997.667 | 38.372 Vb | 73.90 | 
| 总计Total | 29 | 1 382.933 | 51.925 | — | 
表6 4个地理种群ChiVMV CP基因的分子方差分析
Table 6 Molecular analysis of variance of ChiVMV CP gene in 4 geographic populations
| 变异来源 Source of variation  |  自由度 Degree of freedom  |  平方和 Sum of squares  |  变量组分 Variation component  |  变异百分比/% Percentage of variation  | 
|---|---|---|---|---|
| 不同种群间Among populations | 3 | 385.267 | 13.553 Va | 26.10 | 
| 种群内Within populations | 26 | 997.667 | 38.372 Vb | 73.90 | 
| 总计Total | 29 | 1 382.933 | 51.925 | — | 
| 种群 Population  |  Tajima’s D | P值 P-value  |  Fu’s FS | P值 P-value  | 
|---|---|---|---|---|
| 中国西南地区 Southwest China | 0.465 | 0.735 | -1.150 | 0.197 | 
| 印度 India | -0.329 | 0.447 | 1.567 | 0.525 | 
| 中国沿海地区 Coastal areas of China | -0.190 | 0.544 | 2.005 | 0.485 | 
| 其他 Other | 0.260 | 0.720 | 2.898 | 0.571 | 
表7 不同种群辣椒脉斑驳病毒CP基因的中性检验分析
Table 7 Neutrality test based on CP gene of ChiVMV in different populations
| 种群 Population  |  Tajima’s D | P值 P-value  |  Fu’s FS | P值 P-value  | 
|---|---|---|---|---|
| 中国西南地区 Southwest China | 0.465 | 0.735 | -1.150 | 0.197 | 
| 印度 India | -0.329 | 0.447 | 1.567 | 0.525 | 
| 中国沿海地区 Coastal areas of China | -0.190 | 0.544 | 2.005 | 0.485 | 
| 其他 Other | 0.260 | 0.720 | 2.898 | 0.571 | 
| 群体Population | 群体Population | KS | KST | KS,KST P-value | Z | Z P-value | Snn | Snn P-value | FST | Nm | 
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 中国西南地区 Southwest China  |  印度 India | 71.374 | 0.192 | 0.000*** | 76.508 | 0.000*** | 0.857 | 0.008** | 0.359** | 0.446 | 
| 中国沿海地区  Coastal areas of China  |  71.168 | 0.164 | 0.002** | 73.738 | 0.001** | 0.800 | 0.055 | 0.337*** | 0.492 | |
| 其他 Other | 77.765 | 0.058 | 0.058 | 75.601 | 0.007** | 0.763 | 0.181 | 0.188* | 1.083 | |
| 印度India | 中国沿海地区  Coastal areas of China  |  77.500 | 0.058 | 0.128 | 22.738 | 0.032* | 0.727 | 0.032* | 0.102 | 2.203 | 
| 其他 Other | 90.667 | 0.055 | 0.147 | 19.533 | 0.120 | 0.400 | 0.687 | 0.113 | 1.964 | |
| 中国沿海地区 Coastal areas of China | 其他 Other | 92.352 | 0.050 | 0.148 | 16.307 | 0.200 | 0.444 | 0.200 | 0.096 | 2.352 | 
表8 不同地理来源辣椒脉斑驳病毒种群的遗传分化和基因流分析
Table 8 Genetic differentiation and gene flow of chilli veinal mottle virus populations from different geographical
| 群体Population | 群体Population | KS | KST | KS,KST P-value | Z | Z P-value | Snn | Snn P-value | FST | Nm | 
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 中国西南地区 Southwest China  |  印度 India | 71.374 | 0.192 | 0.000*** | 76.508 | 0.000*** | 0.857 | 0.008** | 0.359** | 0.446 | 
| 中国沿海地区  Coastal areas of China  |  71.168 | 0.164 | 0.002** | 73.738 | 0.001** | 0.800 | 0.055 | 0.337*** | 0.492 | |
| 其他 Other | 77.765 | 0.058 | 0.058 | 75.601 | 0.007** | 0.763 | 0.181 | 0.188* | 1.083 | |
| 印度India | 中国沿海地区  Coastal areas of China  |  77.500 | 0.058 | 0.128 | 22.738 | 0.032* | 0.727 | 0.032* | 0.102 | 2.203 | 
| 其他 Other | 90.667 | 0.055 | 0.147 | 19.533 | 0.120 | 0.400 | 0.687 | 0.113 | 1.964 | |
| 中国沿海地区 Coastal areas of China | 其他 Other | 92.352 | 0.050 | 0.148 | 16.307 | 0.200 | 0.444 | 0.200 | 0.096 | 2.352 | 
| [1] |  
											  doi: 10.1099/jgv.0.001142 pmid: 30156526  | 
										
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