利用SSR荧光标记构建山楂种质分子身份证

doi:10.16420/j.issn.0513-353x.2023-0444

园艺学报 ›› 2024, Vol. 51 ›› Issue (6): 1227-1240.doi: 10.16420/j.issn.0513-353x.2023-0444

• 遗传育种·种质资源·分子生物学 • 上一篇下一篇

利用SSR荧光标记构建山楂种质分子身份证

秦宇¹^,², 郭荣琨³, 农惠兰³, 王燕³, 崔凯¹^,^*(), 董宁光³^,^*()

¹ 中国林业科学研究院高原林业研究所，昆明 650223
² 南京林业大学林学院，南京 210037
³ 北京市农林科学院林业果树研究所，北京市落叶果树工程技术研究中心，农业农村部华北地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室，北京 100093

收稿日期:2023-12-08 修回日期:2024-03-19 出版日期:2024-12-19 发布日期:2024-06-21
通讯作者:
* E-mail：cuikai@caf.ac.cn，
dongng@sina.com
基金资助:
国家重点研发课题(2023YFD1000802); 北京市农林科学院科技创新能力专项(KJCX20230101); 北京市农林科学院科技创新能力专项(KJCX20240102); 北京市农林科学院林业果树研究所青年科研基金项目(LGSJJ202302)

Using the Fluorescent Labeled SSR Markers to Establish Molecular Identity of Hawthorn

QIN Yu¹^,², GUO Rongkun³, NONG Huilan³, WANG Yan³, CUI Kai¹^,^*(), DONG Ningguang³^,^*()

¹ Institute of Highland Forest Science，Chinese Academy of Forestry，Kunming 650223，China
² College of Forestry，Nanjing Forestry University，Nanjing 210037，China
³ Beijing Engineering Research Center for Deciduous Fruit Trees，Key Laboratory of Biology and Genetic Improvement of Horticultural Crops（North China），Ministry of Agriculture and Rural Affairs，Institute of Forestry and Pomology，Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences，Beijing 100093，China

Received:2023-12-08 Revised:2024-03-19 Published:2024-12-19 Online:2024-06-21

摘要/Abstract

摘要：

以91份山楂种质资源为材料，使用SSR标记对其进行分子身份证构建，并进行遗传多样性分析。从山楂基因组数据库中开发并设计了96对引物，筛选出了12对多态性好的引物，利用SSR荧光标记毛细管电泳技术检测扩增条带的分子量，并分析参试样品的扩增带型。采用数字与字母组合的方式，依据12对引物的多态性信息含量由高到低排列引物扩增结果，生成各材料的指纹编码。基于非加权组平均法（unweighted pair-group method with arithmetic means，UPGMA）对91份山楂资源进行聚类分析。结果表明，12对SSR引物从91个山楂种质资源样品中共扩增到67个等位基因，其平均等位基因数、有效等位基因数、观测杂合度、期望杂合度分别为5.583、2.730、0.490、0.593，Shannon’s信息指数平均值为1.195，多态性信息含量介于0.300 ~ 0.715之间，平均为0.551。91份山楂资源的遗传相似系数范围为0.25 ~ 0.98，平均值为0.529，在遗传相似系数0.46处时可分为5大类群。根据引物的多态性信息含量高低选择引物组合，构建了山楂种质区分需要的最少引物组合。

关键词: 山楂, 种质资源, SSR荧光标记, 分子身份证

Abstract:

In present research，simple sequence repeats（SSR）markers were employed to analyze the genetic diversity and to establish the molecular identity of 91 hawthorn accessions. Ninety-six pairs of SSR primers were developed from the hawthorn genome database，and 12 pairs with good polymorphism were selected. The screened primers were labeled with four kinds of fluorescence and used for PCR amplification. The PCR products of the 91 samples were analyzed by capillary electrophoresis. The GeneMarker analysis software was used to determine the sizes of the amplified fragments and the genotypes. The individual digits and uppercase English letters were used to mark each band to encode a fingerprint. According to the polymorphic information content（PIC）of 12 primers，the order of these primer pairs were sorted from high to low，and molecular identities of 91 hawthorn accessions were established. Cluster analysis of 91 hawthorn accessions were performed using the Unweighted pair-group method with arithmetic means（UPGMA）. The results showed that a total of 67 alleles were detected from 12 pairs of SSR primers，with an average of 5.583 alleles per each primers and an average of 2.730 effective alleles. The mean values of observed heterozygosity（H_o），expected heterozygosity（H_e），Shannon’s information index（I），and polymorphic information content（PIC）were 0.490，0.593，1.195，and 0.551（range 0.300-0.715），respectively. The genetic similarity coefficient of 91 hawthorn accessions ranged from 0.25 to 0.98 with an average of 0.529，and the samples could be classified into five groups at the genetic similarity coefficient of 0.46. The molecular identities of the 91 hawthorn accessions were constructed through the selection of primers according to its PIC，these accessions could be distinguished by the least specific primers. This study could provide reliable basis for the identification，evaluation，utilization，and genetic relationship analysis of hawthorn germplasm resources.

Key words: hawthorn, germplasm resources, fluorescent labeled SSR marker, molecular identity

秦宇, 郭荣琨, 农惠兰, 王燕, 崔凯, 董宁光. 利用SSR荧光标记构建山楂种质分子身份证[J]. 园艺学报, 2024, 51(6): 1227-1240.

QIN Yu, GUO Rongkun, NONG Huilan, WANG Yan, CUI Kai, DONG Ningguang. Using the Fluorescent Labeled SSR Markers to Establish Molecular Identity of Hawthorn[J]. Acta Horticulturae Sinica, 2024, 51(6): 1227-1240.

图/表 9

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种名 Species name	品种（品系）名称 Name of cultivar（variety）	原产地 Origin	种名 Species name	品种（品系）名称 Name of cultivar（variety）	原产地 Origin
羽裂山楂	羽裂山楂1号Yulie Shanzha 1	北京 Beijing	大果山楂	蒙阴小金星Mengyin Xiaojinxing	山东 Shandong
Crataegus	羽裂山楂2号Yulie Shanzha 2	河北 Hebei	C. pinnatifida var. major	792605	北京 Beijing
pinnatifida	新宾软籽 Xinbin Ruanzi	辽宁 Liaoning		蒙山红 Mengshanhong	山东 Shandong
	开原软籽 Kaiyuan Ruanzi	辽宁 Liaoning		挂甲峪1号 Guajiayu 1	河北 Hebei
大果山楂	子母红 Zimuhong	山东 Liaoning		792204	北京 Beijing
C. pinnatifida	寒露红 Hanluhong	北京 Beijing		红瓤绵 Hongrangmian	山东 Shandong
var. major	大绵球 Damianqiu	山东 Shandong		通辽红 Tongliaohong	内蒙古 Neimenggu
	大旺 Dawang	吉林 Jilin		安泽红 Anzehong	山西 Shanxi
	歪把红 Waibahong	山东 Shandong		红林实生 Honglin Shisheng	北京 Beijing
	临沂大金星 Linyi Dajinxing	山东 Shandong		劈破石2号 Piposhi 2	北京 Beiing
	早熟铁球 Zaoshu Tieqiu	河北 Hebei		叶赫山楂 Yehe Shanzha	吉林 Jilin
	燕瓤青 Yanrangqing	河北 Hebei		大五棱 Dawuleng	山东 Shandong
	双红 Shuanghong	吉林 Jilin		秋甜 Qiutian	河北 Hebei
	辽宁11号 Liaoning 11	辽宁 Liaoning		紫珍珠 Zizhenzhu	河北 Hebei
	土谷子1号 Tuguzi 1	北京 Beijing		京短1号 Jingduan 1	北京 Beijing
	兴隆红3号 Xinglonghong 3	河北 Hebei		橘红甜山楂 Juhongtian Shanzha	山东 Shandong
	晋甜红 Jintianhong	山西 Shanxi		秋里红 Qiulihong	辽宁 Liaoning
	八月红 Bayuehong	山东 Shandong		算珠红 Suanzhuhong	山东 Shandong
	甜红子 Tianhongzi	山东 Shandong		兴隆红肉 Xinglong Hongrou	河北 Hebei
	金如意 Jinruyi	山东 Shandong		沙峪2号 Shayu 2	北京 Beijing
	北京对照 Beijing Duizhao	北京 Beijing		786202	河南 Henan
	遵化红肉山楂 Zunhua Hongrou Shanzha	河北 Hebei		辽宁10号 Liaoning 10	辽宁 Liaoning
	早红 Zaohong	山东 Shandong	伏山楂 C. bretschneideri	8305	吉林 Jilin
	卧龙岗2号 Wolonggang 2	北京 Beiijng	湖北山楂 C. hupehensis	佳甜 Jiatian	北京 Beijing
	泽州红 Zezhouhong	山西 Shanxi		湖北4号 Hubei 4	北京 Beijing
	鞍山紫肉 Anshan Zirou	辽宁 Liaoning		佳黄 Jiahuang	北京 Beijing
	银冶岭7号 Yinyeling 7	北京 Beijing	云南山楂 C. scabrifolia	云南山楂1号Yunnan Shanzha 1	云南 Yunnan
	795502	河北 Hebei		云南山楂2号Yunnan Shanzha 2	云南 Yunnan
	秋金星 Qiujinxing	辽宁 Liaoning		云南山楂3号 Yunnan Shanzha 3	云南 Yunnan
	李家峪5号 Lijiayu 5	北京 Beijing	滇西山楂 C. oresbia	滇西山楂1号 Dianxi Shanzha 1	云南 Yunnan
	蟹子石4号 Xiezishi 4	北京 Beijing	阿尔泰山楂 C. altaica	阿尔泰山楂1号 Aertai Shanzha 1	新疆 Xinjiang
	开原1号 Kaiyuan 1	辽宁 Liaoning	准噶尔山楂 C. songarica	准噶尔山楂1号 Zhungeer Shanzha 1	新疆 Xinjiang
	左秋1号 Zuoqiu 1	吉林 Jilin	甘肃山楂 C. kansuensis	甘肃山楂1号 Gansu Shanzha 1	陕西 Shanxi
	涧沟2号 Jiangou 2	北京 Beijing		甘肃山楂 2号 Gansu Shanzha 2	甘肃 Gansu
	聂家峪2号 Niejiayu 2	北京 Beijing	毛山楂 C. maximowiczii	毛山楂1号 Maoshanzha 1	黑龙江 Heilongjiang
	792403	北京 Beijing	光叶山楂 C. dahurica	光叶山楂1号 Guangye Shanzha 1	黑龙江 Heilongjiang
	紫肉山楂 Zirou Shanzha	吉林 Jilin	华中山楂 C. wilsonii	华中山楂1号Huazhong Shanzha 1	湖北 Hubei
	蟹子石1号 Xiezishi 1	北京 Beijing	平滑山楂 C. laevigata	红保罗 Hongbaoluo Paul’s Scarlet	欧洲 Europe
	灯笼红 Denglonghong	北京 Beijing		红云 Crimson Cloud	欧洲 Europe
	聂家峪1号 Niejiayu 1	北京 Beijing	单籽山楂 C. monogyna	密枝 Mizhi	欧洲 Europe
	滦红 Luanhong	河北 Hebei	梅叶山楂 C. prunifolia	梅叶山楂1号 Meiye Shanzha 1	欧洲 Europe
	兴隆紫肉 Xinglong Zirou	河北 Hebei	锐刺山楂 C. oxyacantha	锐刺山楂1号 Ruici Shanzha 1	欧洲 Europe
	丹峰 Danfeng	辽宁 Liaoning	鸡距山楂 C. crussgalli	鸡距山楂1号 Jiju Shanzha 1	美国 America
	福山铁球 Fushan Tieqiu	山东 Shandong	绿山楂 C. viridis	冬王 Winter King	美国 America
	兴隆红2号 Xinglonghong 2	河北 Hebei	华盛顿山楂	华盛顿山楂1号	美国 America
	金星 Jinxing	北京 Beijing	C. phaenopyrum	Huashengdun Shanzha 1

种名 Species name	品种（品系）名称 Name of cultivar（variety）	原产地 Origin	种名 Species name	品种（品系）名称 Name of cultivar（variety）	原产地 Origin
羽裂山楂	羽裂山楂1号Yulie Shanzha 1	北京 Beijing	大果山楂	蒙阴小金星Mengyin Xiaojinxing	山东 Shandong
Crataegus	羽裂山楂2号Yulie Shanzha 2	河北 Hebei	C. pinnatifida var. major	792605	北京 Beijing
pinnatifida	新宾软籽 Xinbin Ruanzi	辽宁 Liaoning		蒙山红 Mengshanhong	山东 Shandong
	开原软籽 Kaiyuan Ruanzi	辽宁 Liaoning		挂甲峪1号 Guajiayu 1	河北 Hebei
大果山楂	子母红 Zimuhong	山东 Liaoning		792204	北京 Beijing
C. pinnatifida	寒露红 Hanluhong	北京 Beijing		红瓤绵 Hongrangmian	山东 Shandong
var. major	大绵球 Damianqiu	山东 Shandong		通辽红 Tongliaohong	内蒙古 Neimenggu
	大旺 Dawang	吉林 Jilin		安泽红 Anzehong	山西 Shanxi
	歪把红 Waibahong	山东 Shandong		红林实生 Honglin Shisheng	北京 Beijing
	临沂大金星 Linyi Dajinxing	山东 Shandong		劈破石2号 Piposhi 2	北京 Beiing
	早熟铁球 Zaoshu Tieqiu	河北 Hebei		叶赫山楂 Yehe Shanzha	吉林 Jilin
	燕瓤青 Yanrangqing	河北 Hebei		大五棱 Dawuleng	山东 Shandong
	双红 Shuanghong	吉林 Jilin		秋甜 Qiutian	河北 Hebei
	辽宁11号 Liaoning 11	辽宁 Liaoning		紫珍珠 Zizhenzhu	河北 Hebei
	土谷子1号 Tuguzi 1	北京 Beijing		京短1号 Jingduan 1	北京 Beijing
	兴隆红3号 Xinglonghong 3	河北 Hebei		橘红甜山楂 Juhongtian Shanzha	山东 Shandong
	晋甜红 Jintianhong	山西 Shanxi		秋里红 Qiulihong	辽宁 Liaoning
	八月红 Bayuehong	山东 Shandong		算珠红 Suanzhuhong	山东 Shandong
	甜红子 Tianhongzi	山东 Shandong		兴隆红肉 Xinglong Hongrou	河北 Hebei
	金如意 Jinruyi	山东 Shandong		沙峪2号 Shayu 2	北京 Beijing
	北京对照 Beijing Duizhao	北京 Beijing		786202	河南 Henan
	遵化红肉山楂 Zunhua Hongrou Shanzha	河北 Hebei		辽宁10号 Liaoning 10	辽宁 Liaoning
	早红 Zaohong	山东 Shandong	伏山楂 C. bretschneideri	8305	吉林 Jilin
	卧龙岗2号 Wolonggang 2	北京 Beiijng	湖北山楂 C. hupehensis	佳甜 Jiatian	北京 Beijing
	泽州红 Zezhouhong	山西 Shanxi		湖北4号 Hubei 4	北京 Beijing
	鞍山紫肉 Anshan Zirou	辽宁 Liaoning		佳黄 Jiahuang	北京 Beijing
	银冶岭7号 Yinyeling 7	北京 Beijing	云南山楂 C. scabrifolia	云南山楂1号Yunnan Shanzha 1	云南 Yunnan
	795502	河北 Hebei		云南山楂2号Yunnan Shanzha 2	云南 Yunnan
	秋金星 Qiujinxing	辽宁 Liaoning		云南山楂3号 Yunnan Shanzha 3	云南 Yunnan
	李家峪5号 Lijiayu 5	北京 Beijing	滇西山楂 C. oresbia	滇西山楂1号 Dianxi Shanzha 1	云南 Yunnan
	蟹子石4号 Xiezishi 4	北京 Beijing	阿尔泰山楂 C. altaica	阿尔泰山楂1号 Aertai Shanzha 1	新疆 Xinjiang
	开原1号 Kaiyuan 1	辽宁 Liaoning	准噶尔山楂 C. songarica	准噶尔山楂1号 Zhungeer Shanzha 1	新疆 Xinjiang
	左秋1号 Zuoqiu 1	吉林 Jilin	甘肃山楂 C. kansuensis	甘肃山楂1号 Gansu Shanzha 1	陕西 Shanxi
	涧沟2号 Jiangou 2	北京 Beijing		甘肃山楂 2号 Gansu Shanzha 2	甘肃 Gansu
	聂家峪2号 Niejiayu 2	北京 Beijing	毛山楂 C. maximowiczii	毛山楂1号 Maoshanzha 1	黑龙江 Heilongjiang
	792403	北京 Beijing	光叶山楂 C. dahurica	光叶山楂1号 Guangye Shanzha 1	黑龙江 Heilongjiang
	紫肉山楂 Zirou Shanzha	吉林 Jilin	华中山楂 C. wilsonii	华中山楂1号Huazhong Shanzha 1	湖北 Hubei
	蟹子石1号 Xiezishi 1	北京 Beijing	平滑山楂 C. laevigata	红保罗 Hongbaoluo Paul’s Scarlet	欧洲 Europe
	灯笼红 Denglonghong	北京 Beijing		红云 Crimson Cloud	欧洲 Europe
	聂家峪1号 Niejiayu 1	北京 Beijing	单籽山楂 C. monogyna	密枝 Mizhi	欧洲 Europe
	滦红 Luanhong	河北 Hebei	梅叶山楂 C. prunifolia	梅叶山楂1号 Meiye Shanzha 1	欧洲 Europe
	兴隆紫肉 Xinglong Zirou	河北 Hebei	锐刺山楂 C. oxyacantha	锐刺山楂1号 Ruici Shanzha 1	欧洲 Europe
	丹峰 Danfeng	辽宁 Liaoning	鸡距山楂 C. crussgalli	鸡距山楂1号 Jiju Shanzha 1	美国 America
	福山铁球 Fushan Tieqiu	山东 Shandong	绿山楂 C. viridis	冬王 Winter King	美国 America
	兴隆红2号 Xinglonghong 2	河北 Hebei	华盛顿山楂	华盛顿山楂1号	美国 America
	金星 Jinxing	北京 Beijing	C. phaenopyrum	Huashengdun Shanzha 1

引物名称 Primer name	引物信息（5′-3′） Sequence	产物长度/bp Product size
sz02	F：CACGACGTTGTAAAACGACTCTTCACCGACAGCACAAAA；R：CATAAAGCCGACCCCACTTA	180
sz06	F：CACGACGTTGTAAAACGACTGATGGCAAGCATTAGAGAGG；R：CGGCACATTGGTTCCTTTA	180
sz10	F：CACGACGTTGTAAAACGACCTTGCCCAGAAGTCCAGAAG；R：TCGCCACATCCTTATTAGCC	200
sz11	F：CACGACGTTGTAAAACGACAGCCCTTCGCCTTATCTTTT；R：TTCTCAGCATCCTCCTTTGG	200
sz35	F：CACGACGTTGTAAAACGACTAGAAGTCCGACCGGTTACG；R：GCCCAAGGGTAAGAGTACCA	254
sz45	F：CACGACGTTGTAAAACGACTCGCTCGTGTGTCAGTCTTC；R：GCAAACGCCTACGAAAAGAT	264
sz49	F：CACGACGTTGTAAAACGACCCATGGAATACACAGAAAAGCA；R：GGTTCTGTTTCCTGCGAGAG	176
sz71	F：CACGACGTTGTAAAACGACCAAAAGCGGGAAACAGAGAG；R：GCTCGTCAAGCATCCAAAAT	273
sz80	F：CACGACGTTGTAAAACGACTTCATCGGAGCAGATTCCTT；R：CCCCATTGATCCTCCTACCT	222
sz83	F：CACGACGTTGTAAAACGACGGAGGCTGTTGCTGTTCTTC；R：CAATGGCGTTCTAGGATTCA	224
sz86	F：CACGACGTTGTAAAACGACTCCTGAGATTGCTGGAAACC；R：CCAACAGAAGATTGCCCTTT	225
sz90	F：CACGACGTTGTAAAACGACCCTGCCCATTTTGTTCAGTT；R：CTCAGCTCCAACATTCCTCTG	227

引物名称 Primer name	引物信息（5′-3′） Sequence	产物长度/bp Product size
sz02	F：CACGACGTTGTAAAACGACTCTTCACCGACAGCACAAAA；R：CATAAAGCCGACCCCACTTA	180
sz06	F：CACGACGTTGTAAAACGACTGATGGCAAGCATTAGAGAGG；R：CGGCACATTGGTTCCTTTA	180
sz10	F：CACGACGTTGTAAAACGACCTTGCCCAGAAGTCCAGAAG；R：TCGCCACATCCTTATTAGCC	200
sz11	F：CACGACGTTGTAAAACGACAGCCCTTCGCCTTATCTTTT；R：TTCTCAGCATCCTCCTTTGG	200
sz35	F：CACGACGTTGTAAAACGACTAGAAGTCCGACCGGTTACG；R：GCCCAAGGGTAAGAGTACCA	254
sz45	F：CACGACGTTGTAAAACGACTCGCTCGTGTGTCAGTCTTC；R：GCAAACGCCTACGAAAAGAT	264
sz49	F：CACGACGTTGTAAAACGACCCATGGAATACACAGAAAAGCA；R：GGTTCTGTTTCCTGCGAGAG	176
sz71	F：CACGACGTTGTAAAACGACCAAAAGCGGGAAACAGAGAG；R：GCTCGTCAAGCATCCAAAAT	273
sz80	F：CACGACGTTGTAAAACGACTTCATCGGAGCAGATTCCTT；R：CCCCATTGATCCTCCTACCT	222
sz83	F：CACGACGTTGTAAAACGACGGAGGCTGTTGCTGTTCTTC；R：CAATGGCGTTCTAGGATTCA	224
sz86	F：CACGACGTTGTAAAACGACTCCTGAGATTGCTGGAAACC；R：CCAACAGAAGATTGCCCTTT	225
sz90	F：CACGACGTTGTAAAACGACCCTGCCCATTTTGTTCAGTT；R：CTCAGCTCCAACATTCCTCTG	227

引物名称 Primer name	等位基因数 N_a	有效等位基因 N_e	Shannon’s多样性指数 I	观测杂合度 H_o	期望杂合度 H_e	多态性信息含量 PIC
sz2	4	2.373	0.996	0.533	0.579	0.496
sz6	3	1.647	0.708	0.209	0.393	0.356
sz10	6	4.110	1.508	0.759	0.757	0.715
sz11	6	2.537	1.226	0.192	0.606	0.560
sz35	5	1.836	0.929	0.264	0.455	0.426
sz45	5	1.454	0.693	0.239	0.312	0.300
sz49	7	3.944	1.564	0.656	0.746	0.711
sz71	10	3.907	1.716	0.708	0.744	0.708
sz80	5	2.407	1.185	0.433	0.585	0.552
sz83	6	3.248	1.438	0.522	0.692	0.655
sz86	6	2.800	1.342	0.505	0.643	0.611
sz90	4	2.497	1.030	0.854	0.599	0.517
平均值 Average	5.583	2.730	1.195	0.490	0.593	0.551

利用SSR荧光标记构建山楂种质分子身份证

Using the Fluorescent Labeled SSR Markers to Establish Molecular Identity of Hawthorn

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引物名称 Primer name	5′端标记荧光 Fluorescent labelled	退火温度/℃ Annealing temperature	扩增带型数 Number of amplified bands	扩增片段大小/bp Size of bands amplified
sz2	FAM	60	8	180 ~ 196
sz6	FAM	59	6	191 ~ 200
sz10	FAM	60	11	214 ~ 272
sz11	ROX	60	9	220 ~ 264
sz35	ROX	59	12	272 ~ 282
sz45	ROX	60	7	282 ~ 320
sz49	NED	60	21	154 ~ 204
sz71	NED	60	14	282 ~ 314
sz80	VIC	60	10	240 ~ 270
sz83	VIC	59	9	280 ~ 248
sz86	VIC	60	10	241 ~ 269
sz90	FAM	59	6	240 ~ 260

带型编号 Code of pattern	sz10	sz49	sz71	sz83	sz86	sz11	sz80	sz90	sz2	sz35	sz6	sz45
1	214/214	154/154	282/284	208/208	241/241	220/220	240/240	240/240	180/180	272/272	191/191	282/282
2	214/216	182/184	282/292	208/220	241/245	220/234	240/242	240/246	180/193	272/274	191/197	282/292
3	214/220	182/194	284/284	236/236	241/253	220/236	240/244	240/249	187/187	272/276	191/200	282/304
4	216/216	182/196	284/292	236/245	241/263	220/264	240/252	240/260	187/193	272/282	197/197	282/318
5	216/218	184/194	284/294	236/248	245/245	224/224	240/270	246/246	187/196	274/274	197/200	292/292
6	216/220	186/186	286/286	239/248	245/249	224/236	242/242	260/260	193/193	274/276	200/200	304/304
7	218/218	186/188	286/290	245/245	245/263	236/236	244/244		193/196	274/280		304/320
8	218/220	186/200	286/292	245/248	249/249	260/260	244/252		196/196	274/282
9	220/220	186/204	290/290	248/248	263/263	264/264	252/252			276/276
A	262/262	188/188	290/292		269/269		270/270			276/282
B	262/272	188/190	292/292							280/280
C		190/194	292/294							282/282
D		190/204	294/294
E		194/194	314/314
F		194/196
G		194/200
H		194/204
I		196/196
J		196/204
K		200/204
L		204/204

引物组合 Primer combination	新增可区分的品种 Germplasms can be distinguished	小计 Subtotal	累计 Total
sz10	冬王、红保罗、华中山楂1号、密枝、华盛顿山楂1号、子母红、大绵球、双红、金如意、秋金星、开原1号、兴隆红肉 Winter King，Paul’s Scarlet，Huazhongshanzha 1，Mizhi，Huashengdun Shanzha 1，Zimuhong，Damianqiu，Shuanghong，Jinruyi，Qiujinxing，Kaiyuan 1，Xionglong Hongrou	12	12
sz10 + sz49	歪把红、辽宁11号、甘肃山楂1号、甜红子、8305、羽裂山楂1号、羽裂山楂2号、云南山楂2号、甘肃山楂2号、新宾软籽、开原软籽、灯笼红、光叶山楂1号、毛山楂1号、丹峰、福山铁球、金星、蒙山红、792204、安泽红、梅叶山楂1号、佳甜、大五棱、佳黄、滇西山楂1号、云南山楂1号、云南山楂3号 Waibahong，Liaoning 11，Gansu Shanzha 1，Tianhongzi，8305，Yulie Shanzha 1，Yuelie Shanzha 2，Yunnan Shanzha 2，Gansu Shanzha 2，Xinbin Ruanzi，Kaiyuan Ruanzi，Denglonghong，Guangye Shanzha 1，Maoshanzha 1，Danfeng，Fushan Tieqiu，Jinxing，Mengshanhong，792204，Anzehong，Meiye Shanzha 1，Jiatian，Dawuleng，Jiahuang，Dianxi Shanzha 1，Yunnan Shanzha 1，Yunnan Shanzha 3	27	39
sz10 + sz49 + sz71	鸡距山楂1号、兴隆紫肉、通辽红、红林实生、湖北4号、叶赫山楂、秋里红 Jijushanzha 1，Xinglong Zirou，Tongliaohong，Honglin Shisheng，Hubei 4，Yehe Shanzha，Qiulihong	7	46
sz10 + sz49 + sz71 + sz83	大旺、锐刺山楂1号、早红、京短1号、红云、沙峪2号 Dawang，Ruici Shanzha 1，Zaohong，Jingduan 1，Crimson Cloud，Shayu 2	6	52
sz10 + sz49 + sz71 + sz83 + sz86	早熟铁球、土谷子1号、晋甜红、泽州红、银冶岭7号、795502、李家峪5号、792403、紫肉山楂、蟹子石1号、挂甲峪1号、秋甜、786202 Zaoshu Tieqiu，Tuguzi 1，Jintianhong，Zezhouhong，Yinyeling 7，795502， Lijiayu 5，792403，Zirou Shanzha，Xiezishi 1，Guajiayu 1，Qiutian，786202	13	65
sz10 + sz49 + sz71 + sz83 + sz86 + sz11	八月红、北京对照、鞍山紫肉、涧沟2号、准噶尔山楂1号、蒙阴小金星 Bayuehong，Beijing Duizhao，Anshan Zirou，Jiangou 2，Zhunger Shanzha 1，Mengyin Xiaojinxing	6	71
sz10 + sz49 + sz71 + sz83 + sz86 + sz11+ sz80	临沂大金星、燕瓤青、兴隆红3号、遵化红肉山楂、卧龙岗2号、蟹子石4号、聂家峪2号、聂家峪1号、滦红、兴隆红2号、792605、劈破石2号、紫珍珠、辽宁10号 Linyi Dajinxing，Yanrangqing，Xinglonghong 3，Zunhua Hongrou Shanzha，Wolonggang 2，Xiezishi 4，Niejiayu 2，Niejiayu 1，Luanhong，Xinglonghong 2，792605，Piposhi 2，Zizhenzhu，Liaoning 10	14	85
sz10 + sz49 + sz71 + sz83 + sz86 + sz11+ sz80 + sz90	阿尔泰山楂1号 Aertai Shanzha 1	1	86
sz10 + sz49 + sz71 + sz83 + sz86 + sz11+ sz80+ sz90 + sz2	寒露红 Hanluhong	1	87
z10 + sz49 + sz71 + sz83 + sz86 + sz11+ sz80 + sz90 + sz2+ sz35	红瓤绵 Hongrangmian	1	88
z10 + sz49 + sz71 + sz83 + sz86 + sz11+ sz80 + sz90 + sz2 + sz35 + sz6	左秋1号，橘红甜山楂 Zuoqiu 1，Juhongtian Shanzha	2	90
z10 + sz49 + sz71 + sz83 + sz86 + sz11+ sz80 + sz90 + sz2 + sz35 + sz6 + sz45	算珠红Suanzhuhong	1	91

种质名称 Germplasm name	分子身份证编码 Molecular ID	种质名称 Germplasm name	分子身份证编码 Molecular ID
冬王 Winter King	2A7368625B66	792403	8F4651327513
红保罗 Paul’s Scarlet	B2B686256961	紫肉山楂 Zirou Shanzha	8F4861327511
华中山楂1号 Huazhong Shanzha 1	7AB757123A61	蟹子石1号 Xiezishi 1	8F4671327511
密枝 Mizhi	A2B986156561	灯笼红 Denglonghong	5F5821126211
华盛顿山楂1号 Huashengdun Shanzha 1	179388827C67	光叶山楂1号 Guangye Shanzha 1	4HD977116311
鸡距山楂1号 Jiju Shanzha 1	2A6368617363	聂家峪1号 Niejiayu 1	8F4631327511
子母红 Zimuhong	8F4751127011	毛山楂1号 Maoshanzha 1	208360926254
寒露红 Hanluhong	8F4751127511	滦红 Luanhong	8F4751427511
大绵球 Damianqiu	644851327511	兴隆紫肉 Xinglong Zirou	5FC853126211
大旺 Dawang	8F4854327521	丹峰 Danfeng	4B1957136211
歪把红 Waibahong	6JB851327524	福山铁球 Fushan Tieqiu	6F5753126811
临沂大金星 Linyi Dajinxing	8F4854427521	准噶尔山楂1号 Zhungeer Shanzha 1	5IC852126214
早熟铁球 Zaoshu Tieqiu	8F4771127511	兴隆红2号 Xinglonghong 2	8F4771427511
燕瓤青 Yanrangqing	8F4771327511	金星 Jinxing	6C2771328512
锐刺山楂1号 Ruici Shanzha 1	B2B356626964	蒙阴小金星 Mengyin Xiaojinxing	8F4864327521
双红 Shuanghong	3F5452127211	792605	8F4761427511
辽宁11号 Liaoning 11	3E3752116511	蒙山红 Mengshanhong	019010347521
甘肃山楂1号 Gansu Shanzha 1	8K6381626141	挂甲峪1号 Guajiayu 1	4EC667436111
土谷子1号 Tuguzi 1	8F4761127511	792204	519210A61533
兴隆红3号 Xinglonghong 3	8F4751227511	红瓤绵 Hongrangmian	8F4751127911
晋甜红 Jintianhong	6JB861327521	通辽红 Tongliaohong	6F3851328511
八月红 Bayuehong	8F4859327521	安泽红 Anzehong	009230A41560
甜红子 Tianhongzi	7C4851326527	红林实生 Honglin Shisheng	6CA757124511
金如意 Jinruyi	494559328711	梅叶山楂1号 Meiye Shanzha 1	2D6368726265
北京对照 Beijing Duizhao	8F4752127511	劈破石2号 Piposhi 2	8F4731427511
遵化红肉山楂 Zunhua Hongrou Shanzha	8F4751327521	佳甜 Jiatian	2ED447327222
8305	454457126133	湖北4号 Hubei 4	2E9237A67525
早红 Zaohong	8F4661427511	叶赫山楂 Yehe Shanzha	8F9231A67011
卧龙岗2号 Wolonggang 2	8F4661127511	大五棱 Dawuleng	6E4720328512
泽州红 Zezhouhong	8F4731127517	秋甜 Qiutian	4EC627436211
鞍山紫肉 Anshan Zirou	8F4851127511	紫珍珠 Zizhenzhu	8F4831427511
羽裂山楂1号 Yulie Shanzha 1	1E0850328514	京短1号 Jingduan 1	019230A61560
羽裂山楂2号 Yulie Shanzha 2	4EC657126411	红云 Crimson Cloud	B2B236A06561
云南山楂2号Yunnan Shanzha 2	18E775128613	佳黄 Jiahuang	6I4771125511
银冶岭7号 Yinyeling 7	8F4871127512	橘红甜山楂 Juhongtian Shanzha	019230A61530
795502	8F4831127511	秋里红 Qiulihong	6EC823527211
秋金星 Qiujinxing	5IC853126211	算珠红 Suanzhuhong	019230A61532
甘肃山楂 2号 Gansu Shanzha 2	2GC467128221	阿尔泰山楂1号 Aertai Shanzha 1	019230A42531
新宾软籽 Xinbin Ruanzi	4F3967126113	滇西山楂1号 Dianxi Shanzha 1	1LD790128B11
李家峪5号 Lijiayu 5	8F4631127511	兴隆红肉 Xinglong Hongrou	93D851128011
蟹子石4号 Xiezishi 4	4EC657436111	云南山楂1号Yunnan Shanzha 1	1KE7A5128817
开原1号 Kaiyuan 1	0F4751020011	沙峪2号 Shayu 2	4EC127426211
左秋1号 Zuoqiu 1	8F4751327512	云南山楂3号 Yunnan Shanzha 3	16E7A5118811
涧沟2号 Jiangou 2	8F4750107511	786202	8F4721527511
聂家峪2号 Niejiayu 2	8F4731327511	辽宁10号 Liaoning 10	019230561531
开原软籽 Kaiyuan Ruanzi	2F1757126811

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利用SSR荧光标记构建山楂种质分子身份证

Using the Fluorescent Labeled SSR Markers to Establish Molecular Identity of Hawthorn

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