园艺学报 ›› 2025, Vol. 52 ›› Issue (3): 575-590.doi: 10.16420/j.issn.0513-353x.2024-0105
汪芸芸1,2,*, 周晖2,*, 邱可立1, 潘海发2, 盛玉2, 石佩2, 谢庆梅2, 陈红莉2, 张金云2,**(), 李大辉1,**(
)
收稿日期:
2024-10-25
修回日期:
2025-01-14
出版日期:
2025-03-25
发布日期:
2025-03-25
通讯作者:
作者简介:
*共同第一作者
基金资助:
WANG Yunyun1,2, ZHOU Hui2, QIU Keli1, PAN Haifa2, SHENG Yu2, SHI Pei2, XIE Qingmei2, CHEN Hongli2, ZHANG Jinyun2,**(), LI Dahui1,**(
)
Received:
2024-10-25
Revised:
2025-01-14
Published:
2025-03-25
Online:
2025-03-25
摘要:
为深入了解组蛋白甲基化在桃树生长发育和应对非生物胁迫中的功能,对含有JmjC结构域的组蛋白去甲基化酶(JMJ)家族基因进行了全基因组鉴定。在桃树基因组中鉴定到了21个JMJ,根据它们的系统发育关系分为5个亚家族。这些家族成员之间存在较大的差异,基因外显子数在7 ~ 33,蛋白中包含12个保守结构域,并且基因启动子上游区域含有不同数量的胁迫响应、激素响应和发育调控元件。选取PpJMJ5作为诱饵,通过酵母双杂交筛库发现了一个潜在互作蛋白PpCIPK1。通过克隆全长进行酵母双杂交试验,证明PpJMJ5与PpCIPK1存在互作关系,可能在一定程度上干扰钙调磷酸酶B类似蛋白(CBL)与其互作蛋白(CIPK)之间的相互作用。PpJMJ5可能在桃树的非生物胁迫响应中发挥重要作用。
汪芸芸, 周晖, 邱可立, 潘海发, 盛玉, 石佩, 谢庆梅, 陈红莉, 张金云, 李大辉. 桃JMJ组蛋白去甲基化酶家族基因鉴定及表达分析[J]. 园艺学报, 2025, 52(3): 575-590.
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用途 Purpose | 名称 Name | 上游引物(5′-3′) Forward primer sequence | 下游引物(3′-5′) Reverse primer sequence |
---|---|---|---|
qRT-PCR | qPpJMJ5 | CTGAATTGCGAAATAGGCTGG | GCCCCTGGAAGGACAAGAA |
酵母双杂 Yeast two-hybrid | pGBKT7-PpJMJ5 | ATGGCCATGGAGGCCGAATTCATGGCTTTTAATTCAGTTCCACCT | CCGCTGCAGGTCGACGGATCCTCACCTTTGCCTGGATGTTGA |
pGADT7-PpJMJ5 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGGCTTTTAATTCAGTTCCACCT | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTCACCTTTGCCTGGATGTTGA | |
pGBKT7-PpCBL5 | ATGGCCATGGAGGCCGAATTCATGGGTTGTTTTAGTTCTAAAGCAA | CCGCTGCAGGTCGACGGATCCACGTAGCAATCTCATCAACCT | |
pGADT7-PpCBL5 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGGGTTGTTTTAGTTCTAAAGCAA | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTCACGTAGCAATCTCATCAACCT | |
pGBKT7-PpCIPK1 | ATGGCCATGGAGGCCGAATTCATGGACCAAGGGGTCCCA | CCGCTGCAGGTCGACGGATCCTCAAACGACGACGTTATGCC | |
pGADT7-PpCIPK1 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGGACCAAGGGGTCCCA | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTCAAACGACGACGTTATGCC | |
pGADT7-PpCIPK2 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGGGACTTGCCAGCAACA | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTCAAGACGATGAATAGCCACG | |
pGADT7-PpCIPK3 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGGTGATCGTAAGAAAAGGTGC | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTCACACTTGGCTAGTCAACAACC | |
pGADT7-PpCIPK4 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGGAAGAAAGGACTGTCTTGTTT | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTCATGAGTCTTGTTGATCACCCT | |
pGADT7-PpCIPK5 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGGTGGTGAGGAAAGTGGGTA | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTCAACGCTTTTTACTTTTACTCTTGC | |
pGADT7-PpCIPK6 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGGAGAAGATGAGTGCGGC | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTTATTTCCTTGATCCTTCAGTAGTTTC | |
pGADT7-PpCIPK7 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGGAAAATAAGGGTAAGGTGTTGA | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTTACTGTTTCTCCTCACCTTGCC | |
pGADT7-PpCIPK10 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGGCAAACCTCACCACCA | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCCTATTCAGAATCTGAAGGTAGATATGAAG | |
pGADT7-PpCIPK11 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGTCGTCGAGGTCGGCG | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTCAAGATGGCAGAGCACCG | |
pGADT7-PpCIPK12 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGCCAGAGATCGAACAGCAG | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTCAATCAGCTGGGCAGTGC | |
pGADT7-PpCIPK13 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGGAGAATAAATCGAATGTGCTG | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCCTATTGTGGCTGATGCTGTTCTAGT | |
pGADT7-PpCIPK14 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGAATCAACCAAAAATCA AGCG | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTTACTTCACTTTTTGCATATCCTCCT | |
pGADT7-PpCIPK15 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGGAAAACAAAGGGAGTG TGTT | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTTATGAATCCTGGGGCGAGA | |
pGADT7-PpCIPK16 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGCCGGAGATCGAGGTAGT | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTTAATTACCGGCGACGTCC | |
pGADT7-PpCIPK17 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGAAGAAGGTGTCGAGAA AGGTAG | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTCAGCAAGTCATTGTTCGAAGC | |
pGADT7-PpCIPK18 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGGCGGATGAAAAAGGCA | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTCAAGCAGCCGTCGAACTG | |
pGBKT7-PpCIPK1-1 | ATGGCCATGGAGGCCGAATTCATGGACCAAGGGGTCCCAC | CCGCTGCAGGTCGACGGATCCTCATACGGCGTCGCATTTCGA | |
pGADT7-PpCIPK1-1 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGGACCAAGGGGTCCCAC | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTCATACGGCGTCGCATTTCGA | |
pGBKT7-PpCIPK1-2 | ATGGCCATGGAGGCCGAATTCGAGGAGGAGAAGTCGAAAT | CCGCTGCAGGTCGACGGATCCTCAAACGACGACGTTATGCCA | |
pGADT7-PpCIPK1-2 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCGAGGAGGAGAAGTCGAAATGCG | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTCAAACGACGACGTTATGCCA | |
LCI | PpJMJ5-Cluc | TACGCGTCCCGGGGCGGTACCATGGCTTTTAATTCAGTTCCACCT | ACGAAAGCTCTGCAGGTCGACTCACCTTTGCCTGGATGTTGA |
PpCIPK1-Nluc | ACGGGGGACGAGCTCGGTACCATGGACCAAGGGGTCCCAC | CGCGTACGAGATCTGGTCGACAACGACGACGTTATGCCACG |
表1 本研究中PCR引物信息
Table 1 PCR primer information in this study
用途 Purpose | 名称 Name | 上游引物(5′-3′) Forward primer sequence | 下游引物(3′-5′) Reverse primer sequence |
---|---|---|---|
qRT-PCR | qPpJMJ5 | CTGAATTGCGAAATAGGCTGG | GCCCCTGGAAGGACAAGAA |
酵母双杂 Yeast two-hybrid | pGBKT7-PpJMJ5 | ATGGCCATGGAGGCCGAATTCATGGCTTTTAATTCAGTTCCACCT | CCGCTGCAGGTCGACGGATCCTCACCTTTGCCTGGATGTTGA |
pGADT7-PpJMJ5 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGGCTTTTAATTCAGTTCCACCT | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTCACCTTTGCCTGGATGTTGA | |
pGBKT7-PpCBL5 | ATGGCCATGGAGGCCGAATTCATGGGTTGTTTTAGTTCTAAAGCAA | CCGCTGCAGGTCGACGGATCCACGTAGCAATCTCATCAACCT | |
pGADT7-PpCBL5 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGGGTTGTTTTAGTTCTAAAGCAA | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTCACGTAGCAATCTCATCAACCT | |
pGBKT7-PpCIPK1 | ATGGCCATGGAGGCCGAATTCATGGACCAAGGGGTCCCA | CCGCTGCAGGTCGACGGATCCTCAAACGACGACGTTATGCC | |
pGADT7-PpCIPK1 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGGACCAAGGGGTCCCA | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTCAAACGACGACGTTATGCC | |
pGADT7-PpCIPK2 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGGGACTTGCCAGCAACA | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTCAAGACGATGAATAGCCACG | |
pGADT7-PpCIPK3 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGGTGATCGTAAGAAAAGGTGC | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTCACACTTGGCTAGTCAACAACC | |
pGADT7-PpCIPK4 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGGAAGAAAGGACTGTCTTGTTT | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTCATGAGTCTTGTTGATCACCCT | |
pGADT7-PpCIPK5 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGGTGGTGAGGAAAGTGGGTA | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTCAACGCTTTTTACTTTTACTCTTGC | |
pGADT7-PpCIPK6 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGGAGAAGATGAGTGCGGC | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTTATTTCCTTGATCCTTCAGTAGTTTC | |
pGADT7-PpCIPK7 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGGAAAATAAGGGTAAGGTGTTGA | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTTACTGTTTCTCCTCACCTTGCC | |
pGADT7-PpCIPK10 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGGCAAACCTCACCACCA | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCCTATTCAGAATCTGAAGGTAGATATGAAG | |
pGADT7-PpCIPK11 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGTCGTCGAGGTCGGCG | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTCAAGATGGCAGAGCACCG | |
pGADT7-PpCIPK12 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGCCAGAGATCGAACAGCAG | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTCAATCAGCTGGGCAGTGC | |
pGADT7-PpCIPK13 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGGAGAATAAATCGAATGTGCTG | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCCTATTGTGGCTGATGCTGTTCTAGT | |
pGADT7-PpCIPK14 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGAATCAACCAAAAATCA AGCG | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTTACTTCACTTTTTGCATATCCTCCT | |
pGADT7-PpCIPK15 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGGAAAACAAAGGGAGTG TGTT | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTTATGAATCCTGGGGCGAGA | |
pGADT7-PpCIPK16 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGCCGGAGATCGAGGTAGT | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTTAATTACCGGCGACGTCC | |
pGADT7-PpCIPK17 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGAAGAAGGTGTCGAGAA AGGTAG | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTCAGCAAGTCATTGTTCGAAGC | |
pGADT7-PpCIPK18 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGGCGGATGAAAAAGGCA | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTCAAGCAGCCGTCGAACTG | |
pGBKT7-PpCIPK1-1 | ATGGCCATGGAGGCCGAATTCATGGACCAAGGGGTCCCAC | CCGCTGCAGGTCGACGGATCCTCATACGGCGTCGCATTTCGA | |
pGADT7-PpCIPK1-1 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCATGGACCAAGGGGTCCCAC | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTCATACGGCGTCGCATTTCGA | |
pGBKT7-PpCIPK1-2 | ATGGCCATGGAGGCCGAATTCGAGGAGGAGAAGTCGAAAT | CCGCTGCAGGTCGACGGATCCTCAAACGACGACGTTATGCCA | |
pGADT7-PpCIPK1-2 | GCCATGGAGGCCAGTGAATTCGAGGAGGAGAAGTCGAAATGCG | ATTCATCTGCAGCTCGAGCTCTCAAACGACGACGTTATGCCA | |
LCI | PpJMJ5-Cluc | TACGCGTCCCGGGGCGGTACCATGGCTTTTAATTCAGTTCCACCT | ACGAAAGCTCTGCAGGTCGACTCACCTTTGCCTGGATGTTGA |
PpCIPK1-Nluc | ACGGGGGACGAGCTCGGTACCATGGACCAAGGGGTCCCAC | CGCGTACGAGATCTGGTCGACAACGACGACGTTATGCCACG |
亚家族 Subfamily | 基因 Gene | ID | 染色体位置 Chromosomal location | 蛋白质长度/aa Protein length | 等电点pI | 亚细胞定位 Subcellular localization |
---|---|---|---|---|---|---|
KDM4/HDM3 | PpJMJ1 | Prupe.2G211400 | 2 | 1 553 | 6.08 | 细胞核Cell nucleus |
PpJMJ2 | Prupe.5G159200 | 5 | 1 486 | 8.73 | 细胞核Cell nucleus | |
PpJMJ3 | Prupe.5G028800 | 5 | 893 | 8.27 | 细胞核Cell nucleus | |
KDM5/JARID | PpJMJ4 | Prupe.6G349900 | 6 | 1 227 | 6.26 | 细胞核Cell nucleus |
PpJMJ5 | Prupe.8G222100 | 8 | 709 | 7.93 | 细胞核Cell nucleus | |
PpJMJ6 | Prupe.4G102200 | 4 | 1 067 | 5.64 | 细胞核Cell nucleus | |
PpJMJ7 | Prupe.8G028600 | 8 | 461 | 6.15 | 细胞核Cell nucleus | |
PpJMJ8 | Prupe.5G099000 | 5 | 1 851 | 6.66 | 细胞核Cell nucleus | |
JMJD6 | PpJMJ9 | Prupe.1G521300 | 1 | 1 001 | 5.33 | 细胞质Cytoplasm |
PpJMJ10 | Prupe.7G089800 | 7 | 521 | 5.91 | 线粒体Mitochondria | |
PpJMJ11 | Prupe.6G322900 | 6 | 942 | 5.78 | 细胞核Cell nucleus | |
KDM3/JHDM2 | PpJMJ12 | Prupe.2G123400 | 2 | 853 | 8.70 | 细胞核Cell nucleus |
PpJMJ13 | Prupe.5G015100 | 5 | 979 | 6.72 | 细胞核Cell nucleus | |
PpJMJ14 | Prupe.4G016300 | 4 | 867 | 5.60 | 细胞核Cell nucleus | |
PpJMJ15 | Prupe.2G309900 | 2 | 1 770 | 8.12 | 细胞核Cell nucleus | |
PpJMJ16 | Prupe.2G189600 | 2 | 1 051 | 6.86 | 细胞核Cell nucleus | |
PpJMJ17 | Prupe.4G034800 | 4 | 1 031 | 8.56 | 细胞核Cell nucleus | |
PpJMJ18 | Prupe.5G169900 | 5 | 480 | 5.09 | 细胞质Cytoplasm | |
JMJC domain-only | PpJMJ19 | Prupe.6G015700 | 6 | 407 | 5.37 | 细胞核Cell nucleus |
PpJMJ20 | Prupe.8G234700 | 8 | 556 | 5.11 | 细胞核Cell nucleus | |
PpJMJ21 | Prupe.4G147600 | 4 | 342 | 5.18 | 细胞核Cell nucleus |
表2 桃JMJ蛋白的理化性质与亚细胞定位预测
Table 2 Prediction of physicochemical properties and subcellular localization of peach JMJ proteins
亚家族 Subfamily | 基因 Gene | ID | 染色体位置 Chromosomal location | 蛋白质长度/aa Protein length | 等电点pI | 亚细胞定位 Subcellular localization |
---|---|---|---|---|---|---|
KDM4/HDM3 | PpJMJ1 | Prupe.2G211400 | 2 | 1 553 | 6.08 | 细胞核Cell nucleus |
PpJMJ2 | Prupe.5G159200 | 5 | 1 486 | 8.73 | 细胞核Cell nucleus | |
PpJMJ3 | Prupe.5G028800 | 5 | 893 | 8.27 | 细胞核Cell nucleus | |
KDM5/JARID | PpJMJ4 | Prupe.6G349900 | 6 | 1 227 | 6.26 | 细胞核Cell nucleus |
PpJMJ5 | Prupe.8G222100 | 8 | 709 | 7.93 | 细胞核Cell nucleus | |
PpJMJ6 | Prupe.4G102200 | 4 | 1 067 | 5.64 | 细胞核Cell nucleus | |
PpJMJ7 | Prupe.8G028600 | 8 | 461 | 6.15 | 细胞核Cell nucleus | |
PpJMJ8 | Prupe.5G099000 | 5 | 1 851 | 6.66 | 细胞核Cell nucleus | |
JMJD6 | PpJMJ9 | Prupe.1G521300 | 1 | 1 001 | 5.33 | 细胞质Cytoplasm |
PpJMJ10 | Prupe.7G089800 | 7 | 521 | 5.91 | 线粒体Mitochondria | |
PpJMJ11 | Prupe.6G322900 | 6 | 942 | 5.78 | 细胞核Cell nucleus | |
KDM3/JHDM2 | PpJMJ12 | Prupe.2G123400 | 2 | 853 | 8.70 | 细胞核Cell nucleus |
PpJMJ13 | Prupe.5G015100 | 5 | 979 | 6.72 | 细胞核Cell nucleus | |
PpJMJ14 | Prupe.4G016300 | 4 | 867 | 5.60 | 细胞核Cell nucleus | |
PpJMJ15 | Prupe.2G309900 | 2 | 1 770 | 8.12 | 细胞核Cell nucleus | |
PpJMJ16 | Prupe.2G189600 | 2 | 1 051 | 6.86 | 细胞核Cell nucleus | |
PpJMJ17 | Prupe.4G034800 | 4 | 1 031 | 8.56 | 细胞核Cell nucleus | |
PpJMJ18 | Prupe.5G169900 | 5 | 480 | 5.09 | 细胞质Cytoplasm | |
JMJC domain-only | PpJMJ19 | Prupe.6G015700 | 6 | 407 | 5.37 | 细胞核Cell nucleus |
PpJMJ20 | Prupe.8G234700 | 8 | 556 | 5.11 | 细胞核Cell nucleus | |
PpJMJ21 | Prupe.4G147600 | 4 | 342 | 5.18 | 细胞核Cell nucleus |
图6 桃不同发育时期果实(A)和组织(B)中JMJ的表达热图 S1 ~ S5分别代表果实第一膨大期(花后34 d)、硬核期(花后71 d)、第二膨大期(花后94 d)、成熟期(花后108 d)和过熟期(花后111 d)。数据框内数值为利用转录组计算的基因表达量TPM,右上角标尺为对基因表达均一化后的数值
Fig. 6 Heat map of JMJs expression in fruit(A)and tissues(B)of peach at different development stages S1-S5 represents the first expansion stage(34 day after anthesis),hard nucleation stage(71 day after anthesis),second expansion stage(94 day after anthesis),maturation stage(108 day after anthesis)and overripe stage(111 day after anthesis),respectively. The values within the data frame represent gene expression levels(TPM)calculated from the transcriptome. The scale in the upper right corner indicates the normalized values after gene expression standardization
图10 PpJMJ5、PpCBL5与PpCIPK1酵母双杂交 A:PpCIPK1截断示意图;B:PpJMJ5/PpCBL5-BD×PpCIPK1-AD酵母双杂交;C:PpCIPK1/PpCIPK1-1/PpCIPK1-2-AD酵母双杂交
Fig. 10 PpJMJ5,PpCBL5 and PpCIPK1 yeast two-hybrid A:PpCIPK1 truncation diagram;B:PpJMJ5/PpCBL5-BD×PpCIPK1-AD yeast two-hybrid;C:PpCIPK1/ PpCIPK1-1 / PpCIPK1-2-AD×PpJMJ5/PpCBL5-BD yeast two-hybrid
图11 PpJMJ5-CLuc和PpCIPK1-CLuc载体示意图(A)及荧光素酶互补成像(B)
Fig. 11 PpJMJ5-CLuc and PpCIPK1-CLuc vectors Schematic diagram(A)and complementary luciferase imaging(B)
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