番茄子叶总蛋白双向电泳体系的建立

园艺学报 ›› 2010, Vol. 37 ›› Issue (4): 661-668.

番茄子叶总蛋白双向电泳体系的建立

黎飞1，徐秋芳1，臧宪朋1，赖亿玉1，程维舜1，徐幼平2,*，蔡新忠1,*

（1浙江大学农业与生物技术学院生物技术研究所，杭州 310029；2浙江大学分析测试中心，杭州 310029）

收稿日期:2009-09-22 修回日期:2010-03-23 出版日期:2010-04-25 发布日期:2010-04-25
通讯作者: 徐幼平,蔡新忠

Establishment of Two-dimensional Electrophoresis System of Tomato Cotyledons

LI Fei1，XU Qiu-fang1，ZANG Xian-peng1，LAI Yi-yu1，CHENG Wei-shun1，XU You-ping2,*，and CAI Xin-zhong1,*

（1Institute of Biotechnology，College of Agriculture and Biotechnology，Zhejiang University，Hangzhou 310029，China；2Centre of Analysis and Measurement，Zhejiang University，Hangzhou 310029，China）

Received:2009-09-22 Revised:2010-03-23 Online:2010-04-25 Published:2010-04-25
Contact: XU You-ping,CAI Xin-zhong

摘要/Abstract

摘要： 通过对IPG胶条梯度、上样方式、上样量、聚焦条件等4方面条件的优化，建立了番茄子叶总蛋白双向电泳体系，即采用TCA丙酮沉淀法提取番茄子叶总蛋白，选用24 cm pH3-7NL的IPG胶条，采用水化上样，上样量300 μg，按聚焦程序Ⅰ或Ⅱ聚焦后进行双向电泳分离和银染染色。若采用制备胶，以获取高含量蛋白点，则将上样量提高至1.5 mg，按聚焦程序Ⅲ进行聚焦后进行双向分离，并采用胶体考马斯亮蓝染色。采用该优化的体系可以获得分辨率高、重复性好的双向电泳图谱。

关键词: 番茄, 双向电泳, 条件优化, 子叶, 蛋白质

Abstract: A two-dimensional electrophoresis（2-DE）system for proteomic analysis of tomato cotyledons was established by optimizing the parameters including the pH gradient of IPG strip，sample application，sample loading and isoelectric focusing conditions. The optimized system include the following steps：Extracting the total protein from tomato cotyledons by TCA/acetone precipitation，separating the proteins with 24 cm pH3-7NL IPG strips，loading protein samples of 300 μg by rehydration method followed by isoelectric focusing programⅠorⅡ，and staining the gels by silver staining after SDS-PAGE electrophoresis. When preparative gel was applied，in order to obtain abundant protein spots，1.5 mg sample was loaded followed by the isoelectric focusing program Ⅲ，and staining with colloidal Coomassie Brilliant Blue. Reproducible profiles with high resolution were obtained by this optimized 2-DE system of tomato cotyledon.

Key words: tomato, two-dimensional electrophoresis（2-DE）, condition optimization, cotyledon, protein

中图分类号:

S 641.2

黎飞;徐秋芳;臧宪朋;赖亿玉;程维舜;徐幼平;蔡新忠;. 番茄子叶总蛋白双向电泳体系的建立[J]. 园艺学报, 2010, 37(4): 661-668.

LI Fei;XU Qiu-fang;ZANG Xian-peng;LAI Yi-yu;CHENG Wei-shun;XU You-ping;and CAI Xin-zhong;. Establishment of Two-dimensional Electrophoresis System of Tomato Cotyledons[J]. ACTA HORTICULTURAE SINICA, 2010, 37(4): 661-668.

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