园艺学报 ›› 2025, Vol. 52 ›› Issue (11): 3090-3102.doi: 10.16420/j.issn.0513-353x.2024-0950
杨紫薇1, 张华1, 邱帅2, 唐玉超1, 傅学浩1, 张嘎尘1, 孙明1,*(
), 刘秀丽1,*(
)
收稿日期:2025-01-08
修回日期:2025-08-06
出版日期:2025-11-26
发布日期:2025-11-26
通讯作者:
基金资助:
YANG Ziwei1, ZHANG Hua1, QIU Shuai2, TANG Yuchao1, FU Xuehao1, ZHANG Gachen1, SUN Ming1,*(
), LIU Xiuli1,*(
)
Received:2025-01-08
Revised:2025-08-06
Published:2025-11-26
Online:2025-11-26
摘要: 以平顶型大叶绣球‘紫夜’(Hydrangea macrophylla‘Ziye’)为材料,观测了小孢子母细胞减数分裂进程,并对不同减数分裂时期的花蕾进行氟乐灵和高温诱导处理,测定了不同处理的2n花粉诱导率和离体培养的2n花粉活力。结果显示,氟乐灵包裹处理在小孢子母细胞时期(pollen mother cell,PMC)诱导效果最佳,而高温诱导则在终变期—中期Ⅰ时效果最佳。0.1%氟乐灵 + 2%二甲基亚砜(DMSO)处理48 h的诱导效果最为理想,高温(40 ℃)处理6 h为最优。经两种方法诱导产生的2n花粉均显示出活力,适用于后续杂交试验。综上,氟乐灵和高温均能有效诱导2n花粉的形成,其中氟乐灵诱导更为高效。
杨紫薇, 张华, 邱帅, 唐玉超, 傅学浩, 张嘎尘, 孙明, 刘秀丽. 高温和氟乐灵诱导绣球产生2n花粉[J]. 园艺学报, 2025, 52(11): 3090-3102.
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图2 大叶绣球减数分裂进程 A:小孢子母细胞;B:前期Ⅰ—偶线期;C:终变期;D:中期Ⅰ;E:后期Ⅰ;F:末期Ⅰ;G:前期Ⅱ;H:中期Ⅱ;I:后期Ⅱ;J:末期Ⅱ;K:四分体时期;L:成熟配子
Fig. 2 Meiosis process in Hydrangea macrophylla A:Pollen mother cell;B:Prophase Ⅰ-leptotene;C:Diakinesis;D:Metaphase Ⅰ;E:Anaphase Ⅰ;F:Telophase Ⅰ; G:Prophase Ⅱ;H:Metaphase Ⅱ;I:AnaphaseⅡ;J:Telophase Ⅱ;K:Tetrad;L:Mature pollen
| 花蕾直径/mm Flower bud diameter | 花药宽/mm Anther width | 花药长/mm Anther length | 花序状态 Morphology of inflorescence | 减数分裂进程 Meiosis stage |
|---|---|---|---|---|
| 1.30 ~ 1.70 | 0.30 ~ 0.60 | 0.50 ~ 0.60 | 不育花未张开、花梗伸长、小叶与花序有一定夹角 Decorative florets closed,pedicel elongating,bracts angled | 小孢子母细胞 Pollen mother cell |
| 1.70 ~ 1.90 | 0.50 ~ 0.70 | 0.60 ~ 0.70 | 不育花未张开、花梗伸长并张开、小叶基本打开 Decorative florets closed,pedicel spreading,bracts open | 细线期—粗线期 Leptotene-pachytene |
| 1.90 ~ 2.00 | 0.60 ~ 0.08 | 0.65 ~ 0.80 | 不育花膨大、花梗伸长、花蕾分散、小叶完全打开 Decorative florets swollen,pedicel elongate,buds loose,bracts fully open | 终变期 Diakinesis |
| 2.00 ~ 2.10 | 0.60 ~ 0.85 | 0.80 ~ 0.85 | 不育花开时打开、花梗进一步伸长、花蕾进一步分散Decorative florets opening,pedicel further elongate,buds more dispersed | 中期Ⅰ—前Ⅱ Metaphase I-ProphaseⅡ |
| 2.20 ~ 2.30 | 0.70 ~ 0.85 | 0.85 ~ 0.95 | 不育花进一步打开、花梗和花蕾进一步分散 Decorative florets fully open,pedicel and buds widely spaced | 前Ⅱ—四分体时期 Prophase Ⅱ-Tetrad |
| > 2.30 | 0.85 ~ 0.90 | 0.95 ~ 1.00 | 不育花张开、小叶成长为正常叶片大小 Decorative florets open,bracts reach mature leaf size | 成熟配子 Mature gametophyte |
表1 大叶绣球花蕾外部形态与减数分裂阶段的对应关系
Table 1 Correlation between microspore meiosis stages and flower bud morphology in Hydrangea macrophylla
| 花蕾直径/mm Flower bud diameter | 花药宽/mm Anther width | 花药长/mm Anther length | 花序状态 Morphology of inflorescence | 减数分裂进程 Meiosis stage |
|---|---|---|---|---|
| 1.30 ~ 1.70 | 0.30 ~ 0.60 | 0.50 ~ 0.60 | 不育花未张开、花梗伸长、小叶与花序有一定夹角 Decorative florets closed,pedicel elongating,bracts angled | 小孢子母细胞 Pollen mother cell |
| 1.70 ~ 1.90 | 0.50 ~ 0.70 | 0.60 ~ 0.70 | 不育花未张开、花梗伸长并张开、小叶基本打开 Decorative florets closed,pedicel spreading,bracts open | 细线期—粗线期 Leptotene-pachytene |
| 1.90 ~ 2.00 | 0.60 ~ 0.08 | 0.65 ~ 0.80 | 不育花膨大、花梗伸长、花蕾分散、小叶完全打开 Decorative florets swollen,pedicel elongate,buds loose,bracts fully open | 终变期 Diakinesis |
| 2.00 ~ 2.10 | 0.60 ~ 0.85 | 0.80 ~ 0.85 | 不育花开时打开、花梗进一步伸长、花蕾进一步分散Decorative florets opening,pedicel further elongate,buds more dispersed | 中期Ⅰ—前Ⅱ Metaphase I-ProphaseⅡ |
| 2.20 ~ 2.30 | 0.70 ~ 0.85 | 0.85 ~ 0.95 | 不育花进一步打开、花梗和花蕾进一步分散 Decorative florets fully open,pedicel and buds widely spaced | 前Ⅱ—四分体时期 Prophase Ⅱ-Tetrad |
| > 2.30 | 0.85 ~ 0.90 | 0.95 ~ 1.00 | 不育花张开、小叶成长为正常叶片大小 Decorative florets open,bracts reach mature leaf size | 成熟配子 Mature gametophyte |
图3 大叶绣球自然产生(A)和氟乐灵诱导产生(B)的2n花粉 黑色箭头为2n花粉
Fig. 3 The 2n pollen of Hydrangea macrophylla induced by natural production(A)and trifluralin(B) The black arrows indicating 2n pollen
| 减数分裂时期 Meiotic stage | 处理浓度(+ 2% DMSO)/% Treatment concentration | 处理时间/h Treatment time | 2n花粉诱导率/% Induction rate of 2n pollen |
|---|---|---|---|
| 小孢子母细胞 Pollen mother cell | 0.05 | 24 | 27.34 ± 1.66 |
| 48 | 47.31 ± 7.11 | ||
| 72 | 40.94 ± 1.65 | ||
| 0.10 | 24 | 42.06 ± 1.93 | |
| 48 | 65.55 ± 6.40 | ||
| 72 | 40.33 ± 7.42 | ||
| 0.15 | 24 | 33.26 ± 9.05 | |
| 48 | 36.46 ± 2.45 | ||
| 72 | - | ||
| 终变期—中期Ⅰ Diakinesis-metaphase Ⅰ | 0.05 | 24 | 34.29 ± 7.50 |
| 48 | 31.66 ± 5.44 | ||
| 72 | 45.23 ± 11.81 | ||
| 0.10 | 24 | 40.73 ± 3.05 | |
| 48 | 39.12 ± 5.42 | ||
| 72 | 31.18 ± 9.27 | ||
| 0.15 | 24 | 35.19 ± 5.76 | |
| 48 | 29.84 ± 10.60 | ||
| 72 | - |
表2 不同氟乐灵包裹处理组合的2n花粉诱导效果
Table 2 The induction effects of 2n pollen by different combinations of trifluralin treatments.
| 减数分裂时期 Meiotic stage | 处理浓度(+ 2% DMSO)/% Treatment concentration | 处理时间/h Treatment time | 2n花粉诱导率/% Induction rate of 2n pollen |
|---|---|---|---|
| 小孢子母细胞 Pollen mother cell | 0.05 | 24 | 27.34 ± 1.66 |
| 48 | 47.31 ± 7.11 | ||
| 72 | 40.94 ± 1.65 | ||
| 0.10 | 24 | 42.06 ± 1.93 | |
| 48 | 65.55 ± 6.40 | ||
| 72 | 40.33 ± 7.42 | ||
| 0.15 | 24 | 33.26 ± 9.05 | |
| 48 | 36.46 ± 2.45 | ||
| 72 | - | ||
| 终变期—中期Ⅰ Diakinesis-metaphase Ⅰ | 0.05 | 24 | 34.29 ± 7.50 |
| 48 | 31.66 ± 5.44 | ||
| 72 | 45.23 ± 11.81 | ||
| 0.10 | 24 | 40.73 ± 3.05 | |
| 48 | 39.12 ± 5.42 | ||
| 72 | 31.18 ± 9.27 | ||
| 0.15 | 24 | 35.19 ± 5.76 | |
| 48 | 29.84 ± 10.60 | ||
| 72 | - |
| 变异来源 Source of variation | df | F | P |
|---|---|---|---|
| 减数分裂时期 Meiotic stage | 1 | 8.61* | 0.006 |
| 处理浓度Treatment concentration | 2 | 50.60** | < 0.001 |
| 处理时间Treatment time | 2 | 26.24** | < 0.001 |
| 减数分裂时期 × 处理浓度Meiotic stage × treatment concentration | 2 | 4.25* | 0.022 |
| 减数分裂时期 × 处理时间Meiotic stage × treatment time | 2 | 10.63** | < 0.001 |
| 处理浓度 × 处理时间Treatment concentration × treatment time | 4 | 22.63** | < 0.001 |
| 减数分裂 × 处理浓度 × 处理时间Meiotic stage × treatment concentration × treatment time | 4 | 0.85 | 0.503 |
表3 不同氟乐灵包裹处理组合大花绣球2n花粉诱导率的方差分析
Table 3 Variance analysis on induction rates of 2n pollen by trifluralin induction in Hydrangea macrophylla under different treatment combination
| 变异来源 Source of variation | df | F | P |
|---|---|---|---|
| 减数分裂时期 Meiotic stage | 1 | 8.61* | 0.006 |
| 处理浓度Treatment concentration | 2 | 50.60** | < 0.001 |
| 处理时间Treatment time | 2 | 26.24** | < 0.001 |
| 减数分裂时期 × 处理浓度Meiotic stage × treatment concentration | 2 | 4.25* | 0.022 |
| 减数分裂时期 × 处理时间Meiotic stage × treatment time | 2 | 10.63** | < 0.001 |
| 处理浓度 × 处理时间Treatment concentration × treatment time | 4 | 22.63** | < 0.001 |
| 减数分裂 × 处理浓度 × 处理时间Meiotic stage × treatment concentration × treatment time | 4 | 0.85 | 0.503 |
| 不同浓度下氟乐灵处理 Treated with different concentrations of trifluralin treatment | 不同时间下氟乐灵处理 Treated with different times of trifluralin treatment | ||
|---|---|---|---|
| 处理浓度/% Treatment concentration | 平均2n花粉诱导率/% Average induction rate of 2n pollen | 处理时间/h Treatment time | 平均2n花粉诱导率/% Average induction rate of 2n pollen |
| 0.05 | 37.80 ± 9.42 b | 24 | 35.48 ± 6.87 b |
| 0.10 | 43.16 ± 12.07 a | 48 | 41.65 ± 13.64 a |
| 0.15 | 22.45 ± 17.28 c | 72 | 26.28 ± 20.43 c |
表4 不同浓度和不同时间下氟乐灵包裹处理大花绣球2n花粉诱导率的多重分析
Table 4 Multiple comparison of the induction rate of 2n pollen in Hydrangea macrophylla treated with different concentrations and different times of trifluralin treatment
| 不同浓度下氟乐灵处理 Treated with different concentrations of trifluralin treatment | 不同时间下氟乐灵处理 Treated with different times of trifluralin treatment | ||
|---|---|---|---|
| 处理浓度/% Treatment concentration | 平均2n花粉诱导率/% Average induction rate of 2n pollen | 处理时间/h Treatment time | 平均2n花粉诱导率/% Average induction rate of 2n pollen |
| 0.05 | 37.80 ± 9.42 b | 24 | 35.48 ± 6.87 b |
| 0.10 | 43.16 ± 12.07 a | 48 | 41.65 ± 13.64 a |
| 0.15 | 22.45 ± 17.28 c | 72 | 26.28 ± 20.43 c |
| 减数分裂时期 Meiotic stage | 处理温度/℃ Treatment temperature | 处理时间/h Treatment time | 2n花粉诱导率/% Induction rates of 2n pollen |
|---|---|---|---|
| 细线期—粗线期 Leptotene-pachytene | 38 | 2 | 3.07 ± 0.93 |
| 4 | 4.83 ± 2.49 | ||
| 6 | 5.12 ± 0.75 | ||
| 40 | 2 | 5.19 ± 0.62 | |
| 4 | 5.75 ± 1.29 | ||
| 6 | 7.76 ± 1.12 | ||
| 42 | 2 | 5.20 ± 0.25 | |
| 4 | 1.14 ± 0.91 | ||
| 6 | - | ||
| 终变期—中期Ⅰ Diakinesis-metaphase Ⅰ | 38 | 2 | 5.46 ± 1.47 |
| 4 | 13.96 ± 1.91 | ||
| 6 | 17.06 ± 3.53 | ||
| 40 | 2 | 12.12 ± 1.47 | |
| 4 | 14.44 ± 3.92 | ||
| 6 | 21.41 ± 2.83 | ||
| 42 | 2 | 8.13 ± 1.43 | |
| 4 | 10.04 ± 0.71 | ||
| 6 | - |
表5 不同高温处理组合的2n花粉诱导效果
Table 5 The induction effects of 2n pollen by different combinations of high temperature treatments
| 减数分裂时期 Meiotic stage | 处理温度/℃ Treatment temperature | 处理时间/h Treatment time | 2n花粉诱导率/% Induction rates of 2n pollen |
|---|---|---|---|
| 细线期—粗线期 Leptotene-pachytene | 38 | 2 | 3.07 ± 0.93 |
| 4 | 4.83 ± 2.49 | ||
| 6 | 5.12 ± 0.75 | ||
| 40 | 2 | 5.19 ± 0.62 | |
| 4 | 5.75 ± 1.29 | ||
| 6 | 7.76 ± 1.12 | ||
| 42 | 2 | 5.20 ± 0.25 | |
| 4 | 1.14 ± 0.91 | ||
| 6 | - | ||
| 终变期—中期Ⅰ Diakinesis-metaphase Ⅰ | 38 | 2 | 5.46 ± 1.47 |
| 4 | 13.96 ± 1.91 | ||
| 6 | 17.06 ± 3.53 | ||
| 40 | 2 | 12.12 ± 1.47 | |
| 4 | 14.44 ± 3.92 | ||
| 6 | 21.41 ± 2.83 | ||
| 42 | 2 | 8.13 ± 1.43 | |
| 4 | 10.04 ± 0.71 | ||
| 6 | - |
| 变异来源 Source of variation | df | F | P |
|---|---|---|---|
| 减数分裂时期 Meiotic stage | 1 | 205.70** | < 0.001 |
| 处理温度Treatment temperature | 2 | 64.97** | < 0.001 |
| 处理时间Treatment time | 2 | 7.91** | 0.001 |
| 减数分裂时期 × 处理温度Meiotic stage × treatment temperature | 2 | 14.13** | < 0.001 |
| 减数分裂时期 × 处理时间Meiotic stage × treatment time | 2 | 9.25** | < 0.001 |
| 处理温度 × 处理时间Treatment temperature × treatment time | 4 | 26.11** | < 0.001 |
| 减数分裂 × 处理温度 × 处理时间Meiotic stage × treatment temperature × treatment time | 4 | 9.78** | < 0.001 |
表6 不同高温处理组合大花绣球2n花粉诱导率的方差分析
Table 7 Variance analysis on induction rates of 2n pollen by high temperature induction in Hydrangea macrophylla under different treatment combination
| 变异来源 Source of variation | df | F | P |
|---|---|---|---|
| 减数分裂时期 Meiotic stage | 1 | 205.70** | < 0.001 |
| 处理温度Treatment temperature | 2 | 64.97** | < 0.001 |
| 处理时间Treatment time | 2 | 7.91** | 0.001 |
| 减数分裂时期 × 处理温度Meiotic stage × treatment temperature | 2 | 14.13** | < 0.001 |
| 减数分裂时期 × 处理时间Meiotic stage × treatment time | 2 | 9.25** | < 0.001 |
| 处理温度 × 处理时间Treatment temperature × treatment time | 4 | 26.11** | < 0.001 |
| 减数分裂 × 处理温度 × 处理时间Meiotic stage × treatment temperature × treatment time | 4 | 9.78** | < 0.001 |
| 不同温度下高温处理 Treated with different temperature of high temperature treatment | 不同时间下高温处理 Treated with different times of high temperature treatment | ||
|---|---|---|---|
| 处理温度/℃ Treatment temperature | 平均2n花粉诱导率/% Average induction rate of 2n pollen | 处理时间/h Treatment time | 平均2n花粉诱导率/% Average induction rate of 2n pollen |
| 38 | 8.25 ± 5.69 b | 2 | 6.52 ± 3.13 b |
| 40 | 11.11 ± 6.12 a | 4 | 8.36 ± 5.33 a |
| 42 | 4.29 ± 3.95 c | 6 | 7.88 ± 5.94 a |
表7 不同温度下高温处理大花绣球2n花粉诱导率的多重分析
Table 7 Multiple comparison of the induction rate of 2n pollen in Hydrangea macrophylla treated with different temperatures and different times of high temperature treatment
| 不同温度下高温处理 Treated with different temperature of high temperature treatment | 不同时间下高温处理 Treated with different times of high temperature treatment | ||
|---|---|---|---|
| 处理温度/℃ Treatment temperature | 平均2n花粉诱导率/% Average induction rate of 2n pollen | 处理时间/h Treatment time | 平均2n花粉诱导率/% Average induction rate of 2n pollen |
| 38 | 8.25 ± 5.69 b | 2 | 6.52 ± 3.13 b |
| 40 | 11.11 ± 6.12 a | 4 | 8.36 ± 5.33 a |
| 42 | 4.29 ± 3.95 c | 6 | 7.88 ± 5.94 a |
图5 绣球2n花粉花粉管伸长及异常现象 A:绣球n花粉花粉管;B:绣球2n花粉花粉管;C:绣球2n花粉不萌发;D:绣球2n花粉花粉管弯曲;E:绣球2n花粉花粉管伸长困难;F:绣球2n花粉不规则
Fig. 5 2n pollen tube elongation of Hydrangea macrophylla and abnormalities in pollen A:n pollen tube of Hydrangea macrophylla;B:2n pollen tube of Hydrangea macrophylla;C:2n pollen not germinating;D:2n pollen tube bending;E:Difficulty in elongation of 2n pollen tube;F:Irregularity in 2n pollen
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