苹果属小金海棠MxIrt1基因特异性片段的原核表达及多克隆抗体的制备

园艺学报 ›› 2009, Vol. 36 ›› Issue (10): 1411-1416.

苹果属小金海棠MxIrt1基因特异性片段的原核表达及多克隆抗体的制备

孙春玉^1,2;王忆¹;孔瑾¹;许雪锋¹;李天忠¹;韩振海^1*

(¹中国农业大学园艺植物研究所, 北京100193; ² 吉林农业大学生命科学学院, 长春130118)

收稿日期:2009-03-02 修回日期:2009-08-29 出版日期:2009-10-25 发布日期:2009-10-25
通讯作者: 韩振海

Prokaryotic Expression of MxIrt1 Genes Segment and the Prepara tion of ItsPolyclonal Antibody

SUN Chun-yu^1,2;WANG Yi¹;KONG Jin¹;XU Xue-feng¹;L I Tian-zhong¹;HAN Zhen-hai^1*

(¹Institute of Horticultural Plants, China AgriculturalUniversity, Beijing 100193, China; ²College of Life Sciences, Jilin Agricultural University,Changchun130118, China)

Received:2009-03-02 Revised:2009-08-29 Online:2009-10-25 Published:2009-10-25
Contact: HAN Zhen-hai

摘要/Abstract

摘要： MxIrt1是从苹果属植物小金海棠中克隆出的二价阳离子转运膜蛋白基因。为进一步研究该基
因的功能, 利用MxIrt1基因位于第3和第4跨膜区之间的162 bp片段, 构建了原核表达载体pGEX-MxIrt1,经原核表达、亲和层析、获得GST2MxIRT1融合蛋白, 以融合蛋白为抗原, 制备多克隆抗体, ELISA方法检测抗体效价阳性, 蛋白质印迹检测植物体内总蛋白, 获得与预期大小一致的特异性条带。上述结果表明,表达的目的蛋白可用于免疫组织化学、蛋白质印迹检测。

关键词: 苹果属, 小金海棠, MxIrt1基因, 特异片段, 原核表达, 多克隆抗体

Abstract: MxIrt1 is a iron transport p rotein gene from M alus xiaojinensis. To study the functional characteristic of MxIrt1, the recombinant plasmid pGEX-MxIrt1 was constructed with 162 bp segments between 3 rd and 4 th TMR (Transmembrane region) , following the expression in E.coli with high efficiency, purification using Glutathione Sepharose 4B, the recombinant GST-MxIRT1 protein was obtained. ELISA assay detected the reactivity of the polycolonal antibody andWestern blot shows that specific band was corresponding to the expectation. The recombinant GST-MxIRT1 protein can also be used for immunohistochemistry.

Key words: Malus, Malus xiaojinensis, MxIrt1, specific segment, prokaryotic expression, polyclonal antibody

中图分类号:

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