园艺学报 ›› 2026, Vol. 53 ›› Issue (4): 1189-1201.doi: 10.16420/j.issn.0513-353x.2025-0343
• 遗传育种 · 种质资源 · 分子生物学 • 上一篇 下一篇
李怡斐, 段敏杰, 黄启中, 王春萍, 黄任中*(
), 张世才*(
)
收稿日期:2025-12-15
修回日期:2026-02-12
出版日期:2026-04-25
发布日期:2026-04-20
通讯作者:
基金资助:
LI Yifei, DUAN Minjie, HUANG Qizhong, WANG Chunping, HUANG Renzhong*(
), ZHANG Shicai*(
)
Received:2025-12-15
Revised:2026-02-12
Published:2026-04-25
Online:2026-04-20
摘要:
为加快创制抗疫病、高辣度加工辣椒细胞质雄性不育(cytoplasmic male sterility,CMS)恢复系,以8个聚合了抗疫病、高辣度及恢复基因的种间三交种为试材进行花药培养诱导双单倍体(doubled haploid,DH),以期获得潜在的疫病抗性、高辣度和CMS恢复系材料。结果表明,供试的8份三交种均成功诱导出胚状体,单倍体苗的人工加倍率89.8%。结合分子标记辅助选择、农艺性状、品质、抗性鉴定和CMS育性恢复能力等综合评价,最终从12份DH系中筛选出3个始花节位较低、抗疫病且辣度较高的CMS恢复系。该3份DH系是组配高辣、抗病CMS三系配套加工辣椒新品种的理想亲本。
李怡斐, 段敏杰, 黄启中, 王春萍, 黄任中, 张世才. 利用双单倍体技术创制抗疫病和高辣加工辣椒细胞质雄性不育恢复系[J]. 园艺学报, 2026, 53(4): 1189-1201.
LI Yifei, DUAN Minjie, HUANG Qizhong, WANG Chunping, HUANG Renzhong, ZHANG Shicai. Development of Blight-Resistant and High-Pungency Processing-Type Pepper Cytoplasmic Male Sterility(CMS)Restorer Lines Using Doubled Haploid Technology[J]. Acta Horticulturae Sinica, 2026, 53(4): 1189-1201.
图2 辣椒花药培养中胚状体的类型 A ~ C:先形成愈伤组织再出胚;D ~ F:直接形成胚状体;G ~ I:畸形胚
Fig. 2 Types of embryoids in anther culture of pepper A-C:The callus forms first,followed by embryoid formation;D-F:Directly develop into embryoid;G-I:Abnormal embryoids
图3 辣椒花药培养再生植株的倍性鉴定与形态比较 A:流式细胞仪分析单倍体植株;B:流式细胞仪分析双倍体植株;C:单倍体植株;D:双单倍体植株
Fig. 3 Ploidy identification and morphological comparison of regenerated plants in pepper anther culture A:Flow cytometry analysis of haploid plant;B:Flow cytometry analysis of DH line;C:Haploid plant;D:DH line
图4 辣椒DH系抗疫病分子标记FQ01/RQ01 PCR检测结果 M:DL2000 Plus marker;1 ~ 44:DH系,其中泳道6、9、12、15、17 ~ 24、30 ~ 37分别为H202245-9、H202245-11、H202245-13、H202245-14、H202245-15、H202245-16、H202247-6、H202247-9、H202247-11、H202293-1、H202293-2、H202293-8、H202293-9、H202293-10、H202293-12、H202293-13、H202293-14、H202293-15、H202293-16和H202293-17
Fig. 4 PCR Analysis of Phytophthora blight resistance marker FQ01/RQ01 in pepper DH lines M:DL2000 Plus DNA marker;Lanes 1-44:DH lines,Specifically,lanes 6,9,12,15,17-24 and 30-37 correspond to H202245-9,H202245-11,H202245-13,H202245-14,H202245-15,H202245-16,H202247-6,H202247-9,H202247-11,H202293-1,H202293-2,H202293-8,H202293-14,H202293-15,H202293-16,H202293-17,H202293-18,H202293-19,H202293-20 and H202293-21,respectively
| DH系DH lines | 分子标记Molecular marker | PCR检测阳性株PCR detection | 所占比例/% Percentage |
|---|---|---|---|
| 抗疫病 Resistance to Phytophthora blight | FQ01/RQ01 | 20 | 45.5 |
| 恢复基因 Fertility restorer gene | CRF-SCAR | 34 | 77.3 |
| 抗疫病兼恢复基因 Disease-resistant and fertility restorer gene | FQ01/RQ01、CRF-SCAR | 12 | 27.3 |
表1 辣椒DH系抗疫病及育性恢复基因PCR检测结果统计
Table 1 Statistical results of PCR detection for Phytophthora blight resistance and fertility restorer genes in pepper DH lines
| DH系DH lines | 分子标记Molecular marker | PCR检测阳性株PCR detection | 所占比例/% Percentage |
|---|---|---|---|
| 抗疫病 Resistance to Phytophthora blight | FQ01/RQ01 | 20 | 45.5 |
| 恢复基因 Fertility restorer gene | CRF-SCAR | 34 | 77.3 |
| 抗疫病兼恢复基因 Disease-resistant and fertility restorer gene | FQ01/RQ01、CRF-SCAR | 12 | 27.3 |
图5 辣椒DH系育性恢复基因分子标记CRF-SCAR PCR检测结果 M:DL2000 Plus marker;1 ~ 44:DH系,其中泳道1 ~ 7、9 ~ 29、38 ~ 42、44分别为H202245-3、H202245-4、H202245-6、H202245-7、H202245-8、H202245-9、H202245-10、H202245-11、H202245-12、H202245-12-2、H202245-13、202245-13-2、H202245-13-3、H202245-14、H202245-14-3、H202245-15、H202245-16、H202247-6、H202247-9、H202247-11、H202293-1、H202293-2、H202293-8、H202293-9、H202293-10、H202293-11、H202293-12、H202293-13、H202293-22、H202293-23、H202293-24、H202293-25、H202293-26和H202293-28
Fig. 5 Detection results of CRF-SCAR PCR molecular marker for fertility restorer gene in pepper DH lines M:DL2000 Plus marker;1-44:DH lines,Lanes 1-7,9-29,38-42,and 44 correspond to H202245-3,H202245-4,H202245-6,H202245-7,H202245-8,H202245-9,H202245-10,H202245-11,H202245-12,H202245-12-2,H202245-13,202245-13-2,H202245-13-3,H202245-14,H202245-14-3,H202245-15,H202245-16,H202247-6,H202247-9,H202247-11,H202293-1,H202293-2,H202293-8,H202293-9,H202293-10,H202293-11,H202293-12,H202293-13,H202293-22,H202293-23,H202293-24,H202293-25,H202293-26 and H202293-28,respectively
| 供体 Anther culture donor | DH系 DH lines | 株高/cm Height | 冠幅/cm Scope | 始花节位 First flower node | 果形指数 Fruit shape index | 单株挂果数 Fruit number per plant |
|---|---|---|---|---|---|---|
| (H2019410-7 × Bahama Hot) F1 × PI201234 | H202245-9 | 140.07 ± 0.31 a | 95.47 ± 0.83 b | 13.10 ± 0.26 a | 3.51 ± 0.02 e | 105.00 ± 0.40 b |
| H202245-11 | 89.32 ± 1.13 d | 99.10 ± 0.31 a | 10.27 ± 0.12 cd | 4.21 ± 0.01 c | 99.40 ± 1.56 c | |
| H202245-13 | 86.30 ± 0.40 e | 91.45 ± 0.23 c | 11.80 ± 0.00 b | 3.11 ± 0.01 f | 207.53 ± 0.76 a | |
| H202245-14 | 85.06 ± 0.14 e | 87.71 ± 1.06 d | 10.07 ± 0.12 d | 5.88 ± 0.00 b | 53.00 ± 0.53 d | |
| H202245-15 | 130.05 ± 0.10 b | 84.07 ± 0.43 e | 10.93 ± 0.12 c | 4.10 ± 0.02 d | 39.00 ± 0.20 f | |
| H202245-16 | 115.01 ± 0.34 c | 86.53 ± 0.17 d | 10.76 ± 0.60 cd | 6.81 ± 0.02 a | 45.00 ± 0.87 e | |
| (H2019410-7 × Naga Morich) F1 × CM334 | H202247-6 | 121.04 ± 0.56 a | 91.49 ± 0.28 a | 10.93 ± 0.31 b | 6.41 ± 0.02 a | 37.00 ± 0.53 b |
| H202247-9 | 84.71 ± 0.81 c | 87.32 ± 0.63 b | 12.00 ± 0.20 a | 4.69 ± 0.02 c | 137.93 ± 0.23 a | |
| H202247-11 | 92.99 ± 0.81 b | 82.01 ± 0.65 c | 12.00 ± 0.20 a | 6.11 ± 0.03 b | 38.00 ± 0.80 b | |
| (H2018235-3 × Bahama Hot) F1 × PI201234 | H202293-1 | 87.48 ± 0.82 b | 71.29 ± 0.46 a | 12.07 ± 0.23 a | 5.80 ± 0.02 a | 44.80 ± 1.11 b |
| H202293-2 | 91.95 ± 0.53 a | 68.02 ± 0.54 b | 7.00 ± 0.20 c | 4.80 ± 0.02 b | 37.93 ± 1.10 c | |
| H202293-8 | 79.29 ± 0.25 c | 69.84 ± 1.19 ab | 10.00 ± 0.20 b | 4.80 ± 0.02 b | 92.67 ± 0.61 a |
表2 不同辣椒DH系的农艺性状
Table 2 Agronomic traits of different DH lines
| 供体 Anther culture donor | DH系 DH lines | 株高/cm Height | 冠幅/cm Scope | 始花节位 First flower node | 果形指数 Fruit shape index | 单株挂果数 Fruit number per plant |
|---|---|---|---|---|---|---|
| (H2019410-7 × Bahama Hot) F1 × PI201234 | H202245-9 | 140.07 ± 0.31 a | 95.47 ± 0.83 b | 13.10 ± 0.26 a | 3.51 ± 0.02 e | 105.00 ± 0.40 b |
| H202245-11 | 89.32 ± 1.13 d | 99.10 ± 0.31 a | 10.27 ± 0.12 cd | 4.21 ± 0.01 c | 99.40 ± 1.56 c | |
| H202245-13 | 86.30 ± 0.40 e | 91.45 ± 0.23 c | 11.80 ± 0.00 b | 3.11 ± 0.01 f | 207.53 ± 0.76 a | |
| H202245-14 | 85.06 ± 0.14 e | 87.71 ± 1.06 d | 10.07 ± 0.12 d | 5.88 ± 0.00 b | 53.00 ± 0.53 d | |
| H202245-15 | 130.05 ± 0.10 b | 84.07 ± 0.43 e | 10.93 ± 0.12 c | 4.10 ± 0.02 d | 39.00 ± 0.20 f | |
| H202245-16 | 115.01 ± 0.34 c | 86.53 ± 0.17 d | 10.76 ± 0.60 cd | 6.81 ± 0.02 a | 45.00 ± 0.87 e | |
| (H2019410-7 × Naga Morich) F1 × CM334 | H202247-6 | 121.04 ± 0.56 a | 91.49 ± 0.28 a | 10.93 ± 0.31 b | 6.41 ± 0.02 a | 37.00 ± 0.53 b |
| H202247-9 | 84.71 ± 0.81 c | 87.32 ± 0.63 b | 12.00 ± 0.20 a | 4.69 ± 0.02 c | 137.93 ± 0.23 a | |
| H202247-11 | 92.99 ± 0.81 b | 82.01 ± 0.65 c | 12.00 ± 0.20 a | 6.11 ± 0.03 b | 38.00 ± 0.80 b | |
| (H2018235-3 × Bahama Hot) F1 × PI201234 | H202293-1 | 87.48 ± 0.82 b | 71.29 ± 0.46 a | 12.07 ± 0.23 a | 5.80 ± 0.02 a | 44.80 ± 1.11 b |
| H202293-2 | 91.95 ± 0.53 a | 68.02 ± 0.54 b | 7.00 ± 0.20 c | 4.80 ± 0.02 b | 37.93 ± 1.10 c | |
| H202293-8 | 79.29 ± 0.25 c | 69.84 ± 1.19 ab | 10.00 ± 0.20 b | 4.80 ± 0.02 b | 92.67 ± 0.61 a |
| DH系DH lines | 病情指数Disease index | 抗性等级Resistance level | 恢复株率Plants with restoring ability/% |
|---|---|---|---|
| H202245-9 | 28.9 | 抗病 Disease resistance | 100 |
| H202245-11 | 19.2 | 抗病 Disease resistance | 100 |
| H202245-13 | 25.6 | 抗病 Disease resistance | 100 |
| H202245-14 | 28.1 | 抗病 Disease resistance | 100 |
| H202245-15 | 27.9 | 抗病 Disease resistance | 100 |
| H202245-16 | 25.3 | 抗病 Disease resistance | 100 |
| H202247-6 | 23.7 | 抗病 Disease resistance | 100 |
| H202247-9 | 27.5 | 抗病 Disease resistance | 100 |
| H202247-11 | 29.2 | 抗病 Disease resistance | 100 |
| H202293-1 | 29.8 | 抗病 Disease resistance | 100 |
| H202293-2 | 24.2 | 抗病 Disease resistance | 100 |
| H202293-8 | 26.4 | 抗病 Disease resistance | 100 |
| CK1(Early calwonder) | 66.7 | 感病 Susceptible | / |
| CK2(PI201234) | 7.8 | 高感 High susceptible | / |
表3 12辣椒DH系的疫病抗性(田间鉴定)及对CMS不育系的育性恢复能力(测交验证)
Table 3 Phytophthora blight resistance(field identification)and fertility restoration ability to CMS sterile lines(test-cross verification)of DH lines
| DH系DH lines | 病情指数Disease index | 抗性等级Resistance level | 恢复株率Plants with restoring ability/% |
|---|---|---|---|
| H202245-9 | 28.9 | 抗病 Disease resistance | 100 |
| H202245-11 | 19.2 | 抗病 Disease resistance | 100 |
| H202245-13 | 25.6 | 抗病 Disease resistance | 100 |
| H202245-14 | 28.1 | 抗病 Disease resistance | 100 |
| H202245-15 | 27.9 | 抗病 Disease resistance | 100 |
| H202245-16 | 25.3 | 抗病 Disease resistance | 100 |
| H202247-6 | 23.7 | 抗病 Disease resistance | 100 |
| H202247-9 | 27.5 | 抗病 Disease resistance | 100 |
| H202247-11 | 29.2 | 抗病 Disease resistance | 100 |
| H202293-1 | 29.8 | 抗病 Disease resistance | 100 |
| H202293-2 | 24.2 | 抗病 Disease resistance | 100 |
| H202293-8 | 26.4 | 抗病 Disease resistance | 100 |
| CK1(Early calwonder) | 66.7 | 感病 Susceptible | / |
| CK2(PI201234) | 7.8 | 高感 High susceptible | / |
| 编号 Plant lines | 斯克维尔指数(SHU) Skewer Index | 干物质含量/(g · kg-1) Dry matter | 维生素C/(g · kg-1) Vitamin C | 蛋白质/(g · kg-1) Protein | 脂肪/(g · kg-1) Fat |
|---|---|---|---|---|---|
| H202245-11 | 47 972 | 287.00 | 1.06 | 49.20 | 32.00 |
| H202247-9 | 52 875 | 226.00 | 0.97 | 25.20 | 28.00 |
| H202293-8 | 53 523 | 330.00 | 0.61 | 37.20 | 20.00 |
表4 辣椒花培DH系果实主要品质指标测定结果
Table 4 Major quality parameters of fruits from pepper DH lines developed by anther culture
| 编号 Plant lines | 斯克维尔指数(SHU) Skewer Index | 干物质含量/(g · kg-1) Dry matter | 维生素C/(g · kg-1) Vitamin C | 蛋白质/(g · kg-1) Protein | 脂肪/(g · kg-1) Fat |
|---|---|---|---|---|---|
| H202245-11 | 47 972 | 287.00 | 1.06 | 49.20 | 32.00 |
| H202247-9 | 52 875 | 226.00 | 0.97 | 25.20 | 28.00 |
| H202293-8 | 53 523 | 330.00 | 0.61 | 37.20 | 20.00 |
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