园艺学报 ›› 2015, Vol. 42 ›› Issue (1): 183-190.doi: 10.16420/j.issn.0513-353x.2014-0740
陶珍珍1,2,李中安2,贾 敏1,唐 萌2,唐科志2,周常勇2,*,周 彦2,*
TAO Zhen-zhen1,2,LI Zhong-an2,JIA Min1,TANG Meng2,TANG Ke-zhi2,ZHOU Chang-yong2,*,and ZHOU Yan2,*
摘要: 根据不同基因型柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)ORF1a的序列差异,设计T3基因型CTV的特异性引物T3-4F/R,通过优化得到最佳反应条件建立T3基因型CTV分离株的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR,并进行灵敏性、重复性试验。应用该方法测定柑橘植株中T3基因型CTV分离株含量。建立了一种特异性检测T3基因型CTV分离株的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法,其灵敏性比普通RT-PCR方法高100倍。标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,扩增效率为97.1%,相关性系数为0.992。组内和组间变异系数均小于2.94%,表明该方法重复性好。田间样品中T3基因型CTV含量差异较大,最高含量是最低含量的1 250倍。本研究中建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法能够准确检测柑橘植株内的T3基因型CTV分离株,可用于研究T3基因型的CTV的变化规律。
中图分类号: