%0 Journal Article %A 杨洪一,郭世辉,李丽丽 %T 间接原位RT-PCR法检测辣椒叶组织中辣椒轻斑驳病毒的分布 %D 2015 %R 10.16420/j.issn.0513-353x.2014-0791 %J 园艺学报 %P 489-495 %V 42 %N 3 %X 为了了解辣椒轻斑驳病毒(Pepper mild mottle virus,PMMoV)在辣椒组织中的分布特点,探索利用间接原位RT-PCR技术对病毒在辣椒组织中进行定位。利用改进的CTAB法从辣椒叶片中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增出PMMoV的特异片段,并经克隆测序,证明其为PMMoV的特异片段。利用PCR技术,制备出了地高辛标记的特异cDNA探针。对原位RT-PCR反应体系进行优化,经过切片制备(切片厚度7 μm、应用Superfrost plus正电荷防脱载玻片)、预处理(1 mg ? L-1蛋白酶K消化5 min)、RT-PCR(37 ℃反转录2.5 h、PCR退火温度为58 ℃)、杂交检测,建立了应用间接原位RT-PCR技术检测PMMoV在辣椒组织中分布的方法。原位RT-PCR结果显示,叶片组织中PMMoV阳性信号主要分布于栅栏组织,其次是海绵组织,表皮组织中也有少量阳性信号。此外,叶柄中可见少量阳性信号,主要位于表皮组织。 %U https://www.ahs.ac.cn/CN/10.16420/j.issn.0513-353x.2014-0791