苹果AFS基因的克隆与原核表达

园艺学报 ›› 2006, Vol. 33 ›› Issue (1): 122-124.

苹果AFS基因的克隆与原核表达

李　萌^{1, 2};隋　娜²;张元湖²;孟庆伟²

(¹山东省农业科学院, 济南250100; ²山东农业大学生命科学学院, 泰安271018)

收稿日期:2005-01-17 修回日期:2005-04-19 出版日期:2006-02-25 发布日期:2006-02-25

Cloning and Prokaryotic Expression of Apple AFS Gene

(¹Shandong Academy of Agricultural Sciences, Ji'nan 250100, China; ²College of Life Sciences, Shandong AgriculturalUniversity, Tai'an 271018, China)

Received:2005-01-17 Revised:2005-04-19 Online:2006-02-25 Published:2006-02-25

摘要/Abstract

摘要： 通过RT-PCR扩增到苹果α - 法尼烯合成酶(α-Farnesene Synthase, AFS) 基因的编码区全长,将其克隆到pET-30a ( + ) 上, 构建了该基因的原核表达载体pET-AFS, 转化大肠杆菌BL21。SDS2PAGE检测结果表明, 此基因表达了1个约66 kD的蛋白, 1 mmol/L异丙基-β - D - 硫代半乳糖苷( IPTG) 诱导该基因高效表达, 6 h表达量最高, 诱导产物以包涵体形式存在。

关键词: 苹果, α - 法尼烯, 原核表达, SDS2PAGE

Abstract: α-farnesene synthase (AFS) gene from apple peel tissue was amplified by RT-PCR, and cloned into pET-30a ( + ) vector to construct recombinant prokaryotic exp ression vector pET-AFS. After transformation of E. coli and induced by 1 mmol/L isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside ( IPTG) , recombinant protein with 66 kD was expressed in pET-AFS system and separated by SDS-PAGE electrophoresis. The maximum of protein was expressed when induced with IPTG for 6 h. The recombinant protein exp ressed as inclusion bodies.

Key words: Apple, α-farnesene, Prokaryotic expression, SDS-PAGE

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