桃成花基因PpLFY的克隆与表达及多克隆抗体制备

园艺学报 ›› 2008, Vol. 35 ›› Issue (11): 1573-1580.

桃成花基因PpLFY的克隆与表达及多克隆抗体制备

安丽君,李天红*

(中国农业大学农学与生物技术学院,北京市果树逆境生理与分子生物学实验室，北京 100094)

收稿日期:2008-07-01 修回日期:2008-09-01 出版日期:2008-11-25 发布日期:2008-11-25
通讯作者: 李天红

Cloning, Expression and Production of Polyclonal Antibodies of Peach PpLFY

AN Li-jun and LI Tian-hong*

（College of Agronomy and Biotechnology, China Agricultural University, Lab of Stress Physiology and Molecular Biology for Tree Fruits, A key Lab of Beijing Municipality, Beijing 100094, China）

Received:2008-07-01 Revised:2008-09-01 Online:2008-11-25 Published:2008-11-25
Contact: LI Tian-hong

摘要/Abstract

摘要：

以‘八月脆’桃成花诱导期腋芽为试材，克隆得到一个FLORICAULA/LEAFY同源基因，命名为PpLEAFY（PpLFY），GenBank登录号为EF175869，该基因cDNA全长1 314 bp，ORF为1 248 bp，编码一个含416个氨基酸残基的蛋白，与其他物种中的LEAFY蛋白的同源性较高,为（74.22%~84.69%）。时期及组织特异性表达分析表明，PpLFY主要在叶片、花瓣及成花诱导期及花芽形态分化初期中表达。构建了pGEX-4T-1/PpLFY原核表达系统，获得了可溶性融合蛋白rPpLFY，分子量约为36 kD。利用该蛋白免疫新西兰大白兔，获得了抗rPpLFY的多克隆抗体，ELISA效价为1:10 000。

关键词: 桃, 成花基因, 克隆, 表达, 多克隆抗体

Abstract:

A FLO/LFY homologous gene named PpLEAFY（PpLFY）was cloned from 'Bayuecui' peach [Prunus persica (L.) Batsch.] axillary bud sampled in the flower induction period. (GenBank accession No. EF175869). The sequence of complete PpLFY cDNA gene was 1 314 bp, with an ORF 1 248 bp encoding 416 amino acids, which shared highly homology between 74.22% to 84.69% with other FLO/LFY protein from other species in the database. RT-PCR analysis showed that PpLFY gene expressed mainly in the flower induction time and early period of morphology differentiation and also the leaf and petal of peach. The prokaryotic expression systems was constructed and induced. The recombinant protein was purified to immunize the rabbit. SDS-PAGE analysis showed that the rPpLFY molecular weight was about 36 kD, EILSA analysis showed that the titer of polyclonal antibody was about 1:10 000.

Key words: peach, flowering gene, cloning, expression, polyclonal antibody

中图分类号:

S 662.1

安丽君;李天红. 桃成花基因PpLFY的克隆与表达及多克隆抗体制备[J]. 园艺学报, 2008, 35(11): 1573-1580.

AN Li-jun and LI Tian-hong. Cloning, Expression and Production of Polyclonal Antibodies of Peach PpLFY[J]. ACTA HORTICULTURAE SINICA, 2008, 35(11): 1573-1580.

[1]	王晓晨, 聂子页, 刘先菊, 段伟, 范培格, 梁振昌, . 脱落酸对‘京香玉’葡萄果实单萜物质合成的影响[J]. 园艺学报, 2023, 50(2): 237-249.
[2]	任菲, 卢苗苗, 刘吉祥, 陈信立, 刘道凤, 眭顺照, 马婧. 蜡梅胚胎晚期丰富蛋白基因CpLEA的表达及抗性分析[J]. 园艺学报, 2023, 50(2): 359-370.
[3]	翟含含, 翟宇杰, 田义, 张叶, 杨丽, 温陟良, 陈海江. 桃SAUR家族基因分析及PpSAUR5功能鉴定[J]. 园艺学报, 2023, 50(1): 1-14.
[4]	袁馨, 徐云鹤, 张雨培, 单楠, 陈楚英, 万春鹏, 开文斌, 翟夏琬, 陈金印, 甘增宇. 猕猴桃后熟过程中ABA响应结合因子AcAREB1调控AcGH3.1的表达[J]. 园艺学报, 2023, 50(1): 53-64.
[5]	赵雪艳, 王琪, 王莉, 王方圆, 王庆, 李艳. 基于比较转录组的延胡索组织差异性表达分析[J]. 园艺学报, 2023, 50(1): 177-187.
[6]	邢柱东, 吕福堂, 郭尚敬, 张演义. 新品种‘聊大红金’桃[J]. 园艺学报, 2023, 50(1): 225-226.
[7]	杨兴旺, 王海波, 王莹莹, 王小龙, 王志强, 刘培培, 刘万春, 王孝娣. 中熟抗寒桃新品种‘中农甘爽’[J]. 园艺学报, 2022, 49(S2): 15-16.
[8]	杨兴旺, 王海波, 王莹莹, 张艺灿, 王宝亮, 刘培培, 史祥宾, 刘万春, 王孝娣. 中熟抗寒桃新品种‘中农白干’[J]. 园艺学报, 2022, 49(S2): 17-18.
[9]	杨兴旺, 刘凤之, 王海波, 王莹莹, 王志强, 史祥宾, 冀晓昊, 刘万春, 王孝娣. 中熟抗寒桃新品种‘中农寒水蜜’[J]. 园艺学报, 2022, 49(S2): 19-20.
[10]	杨兴旺, 刘凤之, 王海波, 王莹莹, 张艺灿, 李鹏, 王小龙, 刘万春, 王孝娣. 晚熟抗寒桃新品种‘中农秋香’[J]. 园艺学报, 2022, 49(S2): 21-22.
[11]	王莹莹, 刘立常, 刘志伍, 杨兴旺, 刘万春, 王孝娣, . 极晚熟桃新品种‘中农冬蜜’[J]. 园艺学报, 2022, 49(S2): 23-24.
[12]	王莹莹, 刘立常, 刘志伍, 杨兴旺, 刘万春, 王孝娣, . 小果油桃新品种‘中农珍珠’[J]. 园艺学报, 2022, 49(S2): 25-26.
[13]	吴延军, 刘庆忠, 陈鸿才, 戚行江, 朱东姿, 郑家祥, 曹学敏, 方丹燕. 甜樱桃新品种‘江南锦’[J]. 园艺学报, 2022, 49(S2): 29-30.
[14]	张晓明, 闫国华, 周宇, 王晶, 段续伟, 吴传宝, 张开春. 甜樱桃砧木新品种‘京春2号’[J]. 园艺学报, 2022, 49(S2): 31-32.
[15]	宋放, 陈奇, 袁炎良, 陈沙, 尹海军, 蒋迎春, . 黄肉猕猴桃新品种‘先沃1号’[J]. 园艺学报, 2022, 49(S2): 47-48.