甜蛋白基因MBLII 对莴苣的遗传转化

园艺学报 ›› 2001, Vol. 28 ›› Issue (3): 246-250.

甜蛋白基因MBLII 对莴苣的遗传转化

刘敬梅^1,2;陈大明²;陈杭²

(¹ 浙江大学园艺系, 杭州310029; ² 北京市农林科学院蔬菜研究中心, 北京100089)

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2001-06-25 发布日期:2001-06-25

Genetic Transformation and Plant Regeneration of Lettuce with SweetProtein Gene MBLII

Liu Jingmei^1,2, Chen Daming², and Chen Hang²

(¹Department of Horticulture, Zhejiang University , Hangzhou 310029; 􀀁 ²Beijing Vegetable Research Center , Beij ing 100089)

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2001-06-25 Published:2001-06-25

摘要/Abstract

摘要： 以4 日龄莴苣(Lactua sativa L.) 无菌苗子叶为外植体, 通过根癌农杆菌介导,成功地进行了马槟榔甜蛋白基因MBLII 对莴苣的遗传转化。抗生素浓度和子叶外植体与农杆菌的共培养时间是影响转化的重要因素。附加卡那霉素( Kan) 50 mg/ L 的诱芽培养基MS I(MS+ NAA 0. 1 mg/ L+ 6􀀁BA 0. 1 mg/ L+ 羧卞青霉素500 mg/ L) 最适于侵染后子叶外植体的诱芽培养。在外植体与农杆菌共培养0~ 7 d 的范围内, 以共培养3 d 最佳( 生芽率58. 3%, 白化率29%) 。1~ 2 cm 再生芽移入诱根培养基MS II (MS+ NAA 0. 05 mg/ L+ Kan 50 mg/ L+ 羧苄青霉素300 mg/ L) 中, 诱根率可达100%。获得的抗性植株经组织化学及PCR 特异扩增鉴定和统计, 7. 6%阳性。Southern blot 结果证明MBL II 基因已整合到莴苣基因组中。

关键词: 甜蛋白, 莴苣, 遗传转化

Abstract: The sweet protein gene MBL II was introduced into lettuce by co􀀁culturing excised cotyledon explants with Agrobacterium tumefaciens . The Agrobacterium strain LBA4404 contained the binary vector pLX10, which carried sweet protein gene MBL II, select ive gene NPTII and reporter
gene GUS . The best transformation efficiency was obtained when explants were co􀀁cultured with Agrobacterium for 3 days and cultured on the selective medium containing 50 mg/ L kanamycine ( shoots regeneration rate 58. 3%, albino rate 29% ) . Roots were induced in all adventitious shoots
on MSII (MS+ NAA 0. 05 mg/ L+ Kan 50 mg/ L+ carbencillin 300 mg/L) . The transgenic nature of regenerants were demonstrated by plant growth on medium containing kanamycine, GUS histochemical assay and PCR amplification. 7. 6% of all Kanamycine resistant shoots was GUS positive.
Southern blot results confirmed that the MBL II gene had been incorporated into the genome of lettuce.

Key words: Sweet protein, Lettuce, Transformation

中图分类号:

刘敬梅;陈大明;陈杭. 甜蛋白基因MBLII 对莴苣的遗传转化[J]. 园艺学报, 2001, 28(3): 246-250.

Liu Jingmei;Chen Daming;and Chen Hang. Genetic Transformation and Plant Regeneration of Lettuce with SweetProtein Gene MBLII[J]. ACTA HORTICULTURAE SINICA, 2001, 28(3): 246-250.

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